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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/3975
AVALIAÇÃO DA TÉCNICA DE NESTED PCR EM TUBO ÚNICO COM DOIS GENES ALVOS PARA DETECÇÃO DE VIBRIO CHOLERAE O1 DIRETAMENTE DO MEIO DE CULTURA
Vibrio Cholerae
Infectologia
Reação em Cadeia da Polimerase
Técnicas de Diagnóstico molecular
Mendes, Carina Lucena | Date Issued:
2007
Alternative title
Evaluation of Nested PCR in a single tube with two target genes for detection of Vibrio cholerae o1 directly from the culture mediumAuthor
Advisor
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract in Portuguese
A cólera é uma doença bacteriana historicamente conhecida por seu potencial de provocar epidemias, tendo levado milhares de indivíduos à morte. É causada pelo bacilo Gramnegativo Vibrio cholerae O1 toxigênico. No Brasil, apesar de grandes avanços no que se refere a prevenção, a infecção ainda persiste e, embora não seja causa de alta mortalidade, sua presença é motivo de preocupação para a rede de Saúde Pública local. A infecção colérica é endêmica no nordeste brasileiro e está relacionada, principalmente, a condições sanitárias precárias. O diagnóstico clássico da infecção é a cultura bacteriana, complementada pela detecção da toxina colérica, o que retarda o resultado do exame. O objetivo principal deste trabalho foi avaliar a técnica de nested PCR em tubo único com dois genes alvos (MSTNPCR) na detecção de V. cholerae O1 diretamente do meio de cultura. Utilizando DNA, a técnica foi capaz de amplificar até 1 pg de V. cholerae O1, além de ter possibilitado a detecção do vibrião diretamente do meio de cultura líquido, sem prévia extração de DNA, apresentando limite de detecção de três Unidades Formadoras de Colônia. Além disso, a MSTNPCR mostrou-se específica para V. cholerae O1 quando testada com vários microrganismos diferentes. Um kit diagnóstico foi montado e estocado a -20 ºC, permanecendo estável durante os quatro meses em que foi testado. A MSTNPCR descrita neste trabalho pode ser útil no diagnóstico da infecção colérica e em investigações epidemiológicas, complementando os resultados obtidos com a cultura bacteriana
Keywords in Portuguese
CóleraVibrio Cholerae
Infectologia
Reação em Cadeia da Polimerase
Técnicas de Diagnóstico molecular
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