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Title: Caracterização Molecular e Biológica do vírus dengue circulante no Brasil
Advisor: Moura Neto, Vivaldo
Galler, Ricardo
Members of the board: Campos, Elena Cristina Caride Siqueira
Takiya, christina Maeda
Nascimento, Jussara Pereira
Authors: Cruz, Ana Cecilia Ribeiro
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: A febre do dengue está amplamente distribuída por todas as áreas tropicais do mundo. Em certas áreas endêmicas, as formas graves da doença, febre hemorrágica do dengue (FHD) e síndrome de choque do dengue (SCD), ocorrem com freqüência. Outras manifestações clínicas, como, por exemplo, encefalopatias, encefalites, mielite transversa, também tem sido observadas. O nosso objetivo foi a caracterização genética e biológica de amostras de vírus VDEN2 e 3, com ênfase no caráter de neurovirulência do vírus VDEN2. As amostras de VDEN 2 e 3 utilizadas foram isoladas na Serviço de Arbovírus do Instituto Evandro Chagas a partir de soro de pacientes com quadro clínico de dengue (FD e FHD) e manifestações neurológicas. Os vírus padrão foram o VDEN2 Nova Guiné C e 44-2, VDEN3 H87. As 11 seqüências do vírus VDEN2 quando comparados entre si e com 16 outras seqüências do VDEN2 apresentaram percentual médio de identidade nucleotídica e aminoácido de 89,5 e 99,8% respectivamente. Os estudos filogenéticos realizados mostram os isolados brasileiros pertencem ao genótipo III de origem Asiática. As 10 seqüências do vírus VDEN3 quando comparados entre si e com 16 outras seqüências do VDEN3 apresentaram percentual médio identidade nucleotídica e aminoácido de 89,6 e 100% respectivamente.Os estudos filogenéticos realizados mostram que estão agrupados ao genótipo III também de origem Asiática. O virus VDEN2 isolado a partir de caso mielite transversa (Bel61082) foi caracterizado pelo sequenciamento nucleotidico da região estrutural assim como em testes de neurovirulência em camundongos recém-nascidos. A susceptibilidade de culturas primárias de neurônios e astrócitos, células de glioma humano, também foi estudada para fins de caracterização do caráter neurovirulento do vírus.O estudo de neurovirulência em infecção de camundongo mostrou sinais aparentes de doença apenas após a inoculação da cepa NGC, mas a replicação do vírus Bel 61082 pode ser detectada por RT-PCR em suspensão de cérebro de camundongo. Obtivemos evidências experimentais de apoptose nas células neuronais infectadas com VDEN2 NGC e Bel61082. No sequenciamento nucleotídico, a principal alteração observada está localizada na proteína M 28, região esta conhecida como pró-apoptótica.
Abstract: The dengue fever is widely distributed in all tropical areas of the world. In certain endemic areas, severe disease, dengue hemorrhagic fever (DHF) and dengue shock syndrome (DSS), occur frequently. Other clinical manifestations such as, for example, encephalopathies, encephalitis, transverse myelitis, has also been observed. Our objective was to characterize genetic and biological samples of viruses VDEN2 and 3, with emphasis on the neurovirulence of the virus VDEN2. The samples of DENV 2 and 3 used were isolated in the Service of the Instituto Evandro Chagas Arboviruses from the serum of patients with clinical dengue (DF and DHF) and neurological manifestations. Viruses were standard VDEN2 New Guinea C and 44-2, VDEN3 H87. The 11 sequences of the virus VDEN2 compared among themselves and with 16 other sequences showed VDEN2 average percentage of nucleotide and amino acid identity of 89.5 and 99.8% respectively. Phylogenetic studies performed show the Brazilian isolates belonged to genotype III of Asian origin. The 10 sequences of the virus VDEN3 compared among themselves and with 16 other sequences showed VDEN3 average percentage nucleotide and amino acid identity of 89.6 and 100% respectively.The phylogenetic studies carried out show that they are grouped to genotype III also of Asian origin. The virus isolated from VDEN2 case transverse myelitis (Bel61082) was characterized by nucleotide sequencing of the framework region as well as tests neurovirulence in mice newborn. The susceptibility of primary cultures of neurons and astrocytes, human glioma cells was also investigated for the characterization of the character neurovirulent vírus.O study of infection in mouse neurovirulence showed no apparent signs of disease after inoculation only NGC strain, but virus replication 61,082 Bel can be detected by RT-PCR on mouse brain suspension. We obtained experimental evidence of apoptosis in neuronal cells infected with NGC and VDEN2 Bel61082. In nucleotide sequencing, the main change observed is located at 28 M protein, an area known as pro-apoptotic.
Keywords: Dengue
Flavivirus
Molecular biology
keywords: Dengue
Flavírus
Biologia Molecular
DeCS: Dengue
Flavivirus
Biologia Molecular
Brasil
Issue Date: 2005
Citation: CRUZ, Ana Cecilia Ribeiro. Caracterização Molecular e Biológica do vírus dengue circulante no Brasil. 2005. 263 f. Tese (Doutorado em Ensino em Biologia Parasitária) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2005.
Date of defense: 2005-07-27
Place of defense: Rio de Janeiro, RJ
Department: Instituto Oswaldo Cruz
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz
Program: Programa Pós-graduação em Ensino em Biologia Parasitária
Copyright: open access
Appears in Collections:IOC - PGBP - Teses de Doutorado

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