A rapid and accurate methylation-sensitive high-resolution melting analysis assay for the diagnosis of Prader Willi and Angelman patients

Abstract

Fundo: As síndromes de Prader Willi (PWS) e Angelman (AS) são raros distúrbios genéticos caracterizados por deleções, disomias uniparentais e defeitos de impressão no cromossomo 15. A perda de função de genes específicos causados ​​por alterações genéticas no alelo paterno causa SPW enquanto a ausência na mãe resultados do alelo AS. O diagnóstico laboratorial de SPW e SA é complexo e exige técnicas de biologia molecular e citogenética para identificar o mecanismo genético relacionado ao desenvolvimento da doença. A análise de metilação do DNA no cromossomo 15 no locus SNURF ‐ SNRPN através do MS ‐ PCR confirma o diagnóstico e distingue entre PWS e AS. Nosso estudo teve como objetivo estabelecer a técnica MS ‐ PCR associada ao derretimento de alta resolução (MS ‐ HRM) no diagnóstico de SPW e SA com um único par de primers. Métodos: Coletamos amostras de sangue de 43 pacientes suspeitos para uma análise citogenética e de metilação. O DNA extraído foi tratado com bissulfito para realizar análises comparativas de metilação. Resultados: MS ‐ HRM e MS ‐ PCR concordaram em 100% dos casos, identificando 19 (44%) SPW, 3 (7%) AS e 21 (49%) Normal. A análise FISH detectou quatro casos de SPW causados ​​por deleções no cromossomo 15. Conclusão: O MS ‐ HRM apresentou bom desempenho com um par exclusivo de primers, dispensando a análise de gel de eletroforese, oferecendo um diagnóstico rápido e reprodutível.