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A RAPID AND ACCURATE METHYLATION-SENSITIVE HIGH-RESOLUTION MELTING ANALYSIS ASSAY FOR THE DIAGNOSIS OF PRADER WILLI AND ANGELMAN PATIENTS
MS ‐ PCR
MS ‐ HRM
Fusão de alta resolução
Síndrome de Angelman
Author
Affilliation
Abstract in Portuguese
Fundo: As síndromes de Prader Willi (PWS) e Angelman (AS) são raros distúrbios genéticos caracterizados por deleções, disomias uniparentais e defeitos de impressão no cromossomo 15. A perda de função de genes específicos causados por alterações genéticas no alelo paterno causa SPW enquanto a ausência na mãe resultados do alelo AS. O diagnóstico laboratorial de SPW e SA é complexo e exige técnicas de biologia molecular e citogenética para identificar o mecanismo genético relacionado ao desenvolvimento da doença. A análise de metilação do DNA no cromossomo 15 no locus SNURF ‐ SNRPN através do MS ‐ PCR confirma o diagnóstico e distingue entre PWS e AS. Nosso estudo teve como objetivo estabelecer a técnica MS ‐ PCR associada ao derretimento de alta resolução (MS ‐ HRM) no diagnóstico de SPW e SA com um único par de primers. Métodos: Coletamos amostras de sangue de 43 pacientes suspeitos para uma análise citogenética e de metilação. O DNA extraído foi tratado com bissulfito para realizar análises comparativas de metilação.
Resultados: MS ‐ HRM e MS ‐ PCR concordaram em 100% dos casos, identificando 19 (44%) SPW, 3 (7%) AS e 21 (49%) Normal. A análise FISH detectou quatro casos de SPW causados por deleções no cromossomo 15. Conclusão: O MS ‐ HRM apresentou bom desempenho com um par exclusivo de primers, dispensando a análise de gel de eletroforese, oferecendo um diagnóstico rápido e reprodutível.
Abstract
Background: Prader Willi (PWS) and Angelman (AS) syndromes are rare genetic disorders characterized by deletions, uniparental disomy, and imprinting defects at chromosome 15. The loss of function of specific genes caused by genetic alterations in paternal allele causes PWS while the absence in maternal allele results AS. The laboratory diagnosis of PWS and AS is complex and demands molecular biology and cytogenetics techniques to identify the genetic mechanism related to the development of the disease. The DNA methylation analysis in chromosome 15 at the SNURF‐SNRPN locus through MS‐PCR confirms the diagnosis and distinguishes between PWS and AS. Our study aimed to establish the MS‐PCR technique associated with High‐Resolution Melting (MS‐HRM) in PWS and AS diagnostic with a single pair of primers.
Methods: We collected blood samples from 43 suspected patients to a cytogenetic and methylation analysis. The extracted DNA was treated with bisulfite to perform comparative methylation analysis. Results: MS‐HRM and MS‐PCR agreed in 100% of cases, identifying 19(44%) PWS, 3(7%) AS, and 21(49%) Normal. FISH analysis detected four cases of PWS caused by deletions in chromosome 15.
Conclusion: The MS‐HRM showed good performance with a unique pair of primers, dispensing electrophoresis gel analysis, offering a quick and reproducible diagnostic.
Keywords in Portuguese
Síndrome de Prader WilliMS ‐ PCR
MS ‐ HRM
Fusão de alta resolução
Síndrome de Angelman
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