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EXPRESSION AND ANTIGENIC ANALYSIS OF THE RECOMBINANT TRP36 PROTEIN FROM EHRLICHIA CANIS SÃO PAULO STRAIN FOR SEROLOGIC TESTS
Alternative title
Expressão e análise antigênica da proteína RTP36 recombinante da amostra São Paulo de Ehrlichia canis para testes sorológicosAuthor
Affilliation
Abstract in Portuguese
Ehrlichia canis é o principal agente etiológico da erliquiose monocítica canina (EMC), uma doença infecciosa canina
globalmente dispersa. No Brasil, a EMC é considerada endêmica, e a infecção pode atingir 65% em cães em
alguns estados. O diagnóstico de erliquiose é importante para fins de tratamento e epidemiológicos. A proteína
TRP36 de E. canis leva a uma resposta humoral com produção de anticorpos em fase aguda, encontrada durante o curso da doença. O objetivo deste estudo foi obter a proteína TRP36 recombinante da amostra São
Paulo de E. canis e avaliar seu potencial como ferramenta para o diagnóstico sorológico da CME. O isolado de
E. canis São Paulo foi cultivado em células da linhagem DH82 e o DNA genômico foi obtido. O fragmento de
DNA bacteriano que codifica toda a ORF de TRP36 foi clonado no vetor pBAD / Thio-TOPO e transformado em
células competentes Escherichia coli DH10B, com o plasmídeo portador de trp36 para expressão de proteínas.
Para avaliar a antigenicidade da proteína, 16 amostras de soro canino foram previamente analisadas (por
PCR e teste sorológico comercial SNAP4Dx). Os resultados estavam de acordo com o teste SNAP4Dx.
Os experimentos que utilizam essa proteína recombinante como antígeno, visando ao desenvolvimento de
um teste sorológico baseado no ELISA, são o próximo passo para produzir um teste de diagnóstico confiável,
acessível e útil para o diagnóstico da EMC no Brasil.
Abstract
Ehrlichia canis is the main etiological agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), a globally canine infectious disease. In Brazil, CME is considered to be endemic, and its prevalence can reach 65% in some states. The diagnosis of ehrlichiosis is important for treatment and epidemiological purposes. The E. canis TRP36 (Tandem Repeat Protein) protein elicits the earliest acute-phase antibody response observed during the course of the disease. This study aimed to generate the recombinant TRP36 protein from E. canis São Paulo strain and to evaluate its potential as a tool for the serologic diagnosis of CME. The E. canis São Paulo isolate was cultivated in DH82 lineage cells, and its genomic DNA was obtained. The bacterial DNA fragment encoding the entire ORF of TRP36 was cloned into the pBAD/Thio-TOPO vector and transformed into Escherichia coli DH10B competent cells with the trp36-bearing plasmid for protein expression. To evaluate the protein antigenicity, 16 canine serum samples were previously tested (by PCR and the commercial SNAP4Dx serological test). The results were in accordance with the SNAP4Dx test. Experiments using this recombinant protein as an antigen, targeting the development of a serologic test based on ELISA methodology, are the next step to produce a reliable, affordable and useful diagnostic tool for CME in Brazil.
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