Terapia fotodinâmica para o tratamento de alguns tumores do sistema nervoso: da concepção aos testes in vitro

Abstract

Apesar do grande avanço sobre o entendimento da biologia de tumores, os fármacos seletivos com reduzidos efeitos colaterais, ainda são insuficientes. Sendo assim, é imprescindível a busca por novas abordagens terapêuticas. Uma opção promissora é a Terapia Fotodinâmica (TFD), que utiliza moléculas fotossensibilizadoras (FS), capazes de gerar espécies reativas de oxigênio na presença de luz com comprimento de onda adequado, causando lesão tecidual seletiva. Este projeto teve como finalidade desenvolver uma proposta de TFD, desde a concepção, até os testes \200Bin vitro \200B , que finalmente possibilite o desenvolvimento de uma estratégia para o tratamento de tumores de difícil prognóstico como glioblastoma. Nesse contexto, nosso primeiro passo foi desenhar e construir dois protótipos de fonte de luz. Esses equipamentos fornecem luz vermelha com potências entre 1,4 ± 0,02 e 26,5 ± 2,8 mW/cm\200B2 \200Bpara aplicações em TFD. Em seguida, os protótipos foram validados testando o FS - azul de metileno (AM), por possuir baixa toxicidade sem estimulação luminosa, além de ser aprovado para uso clínico. Assim sendo, o AM foi aplicado em células tumorais de glioblastoma (GL261 e U87) e de neuroblastoma (SHSY5Y), sendo que a dose de luz de 17,5 ± 1,87 J/cm\200B2\200Blevou a uma diminuição da EC\200B50\200Bdo AM em 50%, nas três linhagens celulares testadas Em seguida, com o auxílio de metodologias de padronização disponíveis para \200Bhigh throughput screening \200B (HTS), foi desenhado um protocolo que permitirá a avaliação \200Bin vitro \200B da atividade fotossensível de novos compostos. Por fim, para potencializar o uso de AM em TFD, procuramos uma via que facilitasse a difusão e a permeabilização seletiva do AM nas células tumorais. Uma possibilidade estudada foi a utilização de poros presentes na membrana de determinadas células. De acordo com a literatura, a molécula de AM (319 Da), passa facilmente através do poro induzido pelo receptor P2X7 (P2X7R) que em resposta a altas doses do agonista ATP, permite passagem de moléculas com aproximadamente 1 kDa. Diante disso, células GL261 e SHSY5Y foram transfectadas com P2X7R e, através dos ensaios de captação de corante (EtBr, IP e YOPRO 1 \03BCM), foi detectada a expressão e a funcionalidade do P2X7R. Avaliando a viabilidade celular, observamos um efeito de potencialização entre o ATP (1 mM) e o AM (50 \03BCM), aumentando assim a eficiência da TFD em 40%. Em síntese, esses resultados sugerem que o poro associado ao P2X7R poderia ser utilizado como via de entrada de fármacos hidrofílicos em células que expressem este receptor. Em conjunto, os resultados apresentados neste trabalho constituem um importante alicerce para o desenvolvimento de uma nova abordagem de AM-TDF, que permita complementar o tratamento de tumores do sistema nervoso.