Caracterização genética de cepas de Leishmania (Viannia) braziliensis provenientes de hospedeiros humanos, cães domésticos e pequenos mamíferos silvestres e sinantrópicos de Minas Gerais, Brasil

Abstract

A Leishmaniose Tegumentar Americana é uma complexa doença parasitária zoonótica que afeta uma ampla diversidade de hospedeiros. No Brasil, o principal agente etiológico que acomete o ser humano é Leishmania (Viannia) braziliensis. Análises que visam caracterizar geneticamente cepas de L. braziliensis são fundamentais para a compreensão da dinâmica entre os diferentes hospedeiros, a origem geográfica e a epidemiologia molecular do parasito. O presente estudo teve por objetivo realizar a caracterização molecular de 28 amostras de L. braziliensis obtidos de diferentes hospedeiros (humanos, cães domésticos e pequenos mamíferos silvestres e sinantrópicos), provenientes de diferentes municípios do estado de Minas Gerais, Brasil. Para alcançar o objetivo proposto, foi realizada a análise de variabilidade genética através de sequenciamento e confecção de filogramas dos marcadores: ITS1, hsp70, alat, g6pd, icd, mpi e pgm. A identificação específica de todas as amostras como L. braziliensis foi realizada através técnica de PCR-RFLP-ITS1 e hsp70 seguido de sequenciamento genético onde as amostras apresentaram um percentual de identidade superior a 98% comparadas com outras cepas disponíveis no GenBank. Uma amostra apresentou perfil de restrição igual a L. guyanensis na PCR-RFLP-ITS1, porém o sequenciamento foi compatível com L. braziliensis para todas as amostras, demonstrando não ser um marcador adequado para identificação do parasito por RFLP. Além disso, o sequenciamento do gene ITS1 não apresentou qualidade suficiente para realizar as demais análises. As amostras 34 e 38 proveniente da Reserva Indígena do Xakriabá apresentaram perfil de restrição variante na PCR-RFLP-hsp70, o que corrobora com estudos prévios. Na análise dos filogramas, estas amostras foram agrupadas separadamente para todos os genes estudados. Todas as amostras estudadas apresentaram diferentes níveis de variações genéticas para os marcadores utilizados neste estudo. Contudo, hsp70 e icd apresentaram altos valores de posições com nucleotídeos divergentes quando comparados com a referência de L. braziliensis, sendo pouco significativos para estudos de variabilidade genética. Observou-se nos diferentes filogramas o agrupamento de amostras provenientes de pequenos mamíferos (PM) juntamente com amostras de cães domésticos e humanos, demonstrando que cepas que circulam em PM podem estar mais adaptadas para circular em diferentes hospedeiros. Os filogramas obtidos para os genes pgm e mpi apresentaram isolamento das amostras de PM silvestres oriundos da Reserva Caraça, o mesmo foi observado para as mostras oriundas do Xakriabá (34, 38 e 71), suportando a hipótese de que ocorram populações de L. braziliensis diferentes de acordo com ambientes específicos em Minas Gerais. Nos filogramas para os genes alat e g6pd, as amostras de cães formaram clusters, separados das demais amostras, sugerindo que cepas específicas podem estar circulando nestes hospedeiros. Resumidamente, podemos concluir que o sequenciamento genético dos alvos moleculares alat, g6pd, mpi e pgm foram úteis para estudos de variabilidade genética e epidemiologia molecular, permitindo uma melhor compreensão sobre história evolutiva destes genes bem como a identificação da ampla diversidade genética de parasitos de L. braziliensis que circulam entre os diferentes hospedeiros nas regiões de Minas Gerais.