Abordagem multidisciplinar do látex medicinal de Euphorbia umbellata (Euphorbiaceae) para sua aplicação como matéria-prima farmacêutica

Abstract

O látex medicinal da Euphorbiaceae Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns (janaúba) é usado popularmente para tratar diversas enfermidades. Foram coletadas oito amostras de látex em dois locais distintos (Barretos (BA) e Nova Friburgo (NF)). Após liofilização direta e extração com EtOH 80%, seus perfis químicos foram empiricamente otimizados em CCD, CLAE-DAD (gradiente CH3CN-H2O) e CG. A separação entre grupos de triterpenos (T) e diterpenos (D) foi ensaiada com o látex liofilizado por (i) extração em fase sólida (EFS) em mini-colunas (RP-18, CH3CN) e (ii) partição por solubilidade em misturas de CH3CN-H2O. Os conteúdos de T e D foram obtidos por CG-DIC, considerando-se os sinais previamente caracterizados por CG-EM nas frações separadas. O conteúdo proteico do látex foi investigado pelo método de Bradford, atividade enzimática e eletroforese. A atividade proteolítica foi avaliada sobre os substratos gelatina, caseína, hemoglobina e BSA, e a inibição enzimática utilizou os inibidores específicos das principais classes de proteínas BZA, E-64, EDTA e pepstatina. Para o látex liofilizado (BA e NF) foram determinados umidade, ponto de fusão, TGA, DSC. Foram avaliados a granulometria, densidade aparente (Da) e compactada (Dc), fluxo por orifício e ângulo de repouso, razão de Hausner (RH), índice de Carr (IC), área superficial (BET), MEV e DRX. A separação eficiente (T x D) em TLC foi estabelecida com 5% de Et2O ou Me2CO em CHCl3 (sílica gel) e CH3CN na fase reversa. Apesar do viés da baixa pureza dos sinais, a técnica de CG revelou-se como a mais adequada para detectar os constituintes triterpenoides e isoprenoides, enquanto CLAE foi adequada para os diterpenos. Todas as amostras de látex apresentaram perfis cromatográficos semelhantes, com variações ocasionais na abundância de constituintes específicos. EFS foi o processo mais eficiente e seletivo para separar grupos de T e D, além de permitir o aumento de carga em 5x na mesma coluna. O látex fresco mostrou possuir 3,45 mg/mL (BA) e 4,59 mg/mL (NF) de proteínas totais, cujas massas foram indicadas por eletroforese como 149, 94, 75, 48, 36, 30, 25, 16, 15, 14 e 12 kDa. Serino- e cisteínoproteases foram as principais classes de proteínas nos látices de ambas origens. Os látices apresentaram umidade média de 3% (BA) e 4% (NF) e faixas de fusão de 95-105 ºC e 190-210 ºC, respectivamente, com amostras semicristalinas e morfologia heterogênea. DSC mostrou um pico endotérmico de entalpia em 15,33 J/g na faixa de 49,96-57,30 °C (BA) e 13,09 J/g na faixa de 47,06-54,09 °C (NF). TGA indicou perda de massa (3-4%) até 100 °C, com efeito mais pronunciado a partir de 250 °C até próximo de 500 °C para BA e NF. As propriedades de fluxo e processabilidade foram diferentes: Da 0,50 g/mL, Dc 0,57 g/mL, RH 1,14, IC 12,28%, ângulo de repouso 15,6o, fluxo por orifício 45 s/100g (BA) e (Da 0,29 g/mL, Dc 0,38 g/mL, RH 1,31, IC 23,68%, ângulo de repouso 18,2o, fluxo por orifício 0,10 s/g (NF). Os resultados obtidos ampliaram o conhecimento sobre o látex de E. umbellata e estabeleceram uma base informacional para subsequentes avanços químicos e farmacotécnicos com essa matéria-prima.