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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/50174
AVALIAÇÃO DO PAPEL DO LPG NA ADESÃO E MIGRAÇÃO DE CÉLULAS HOSPEDEIRAS HUMANAS INFECTADAS POR LEISHMANIA INFANTUM
Nery, Gustavo Lima | Date Issued:
2021
Author
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil.
Abstract in Portuguese
INTRODUÇÃO: A leishmaniose é uma zoonose causada pelo protozoário do gênero Leishmania ssp. que apresenta diferentes manifestações clínicas, a leishmaniose cutânea (LC) e a leishmaniose visceral (LV). A disseminação e homing de células infectadas contendo antígenos de Leishmania são fundamentais para a sobrevivência do parasito no hospedeiro e para o estabelecimento da lesão. Além de fatores do hospedeiro, fatores intrísecos ao parasito são fatores importantes para a manutenção da infecção no hospedeiro. Estudos recentes já demonstraram a relevância da presença do LPG de Leishmania na interação com células hospedeiras, no mecanismo de sobrevivência do parasito, bem como no estabelecimento da infecção. Entretanto, a relação do LPG com a migração e adesão de células hospedeiras humanas ainda precisa ser elucidada. OBJETIVO: Desta forma, o objetivo deste trabalho é avaliar o papel do LPG na adesão e migração de células hospedeiras humanas infectadas por L. infantum. MATERIAL E MÉTODOS: Para isso, células dendríticas e macrófagos humanos foram cultivados, infectados por L. infantum selvagem ou nocaute para o gene lpg2 e submetidos à migração em sistema Transwell. Além disso, foram realizadas imunomarcações com os anticorpos para FAK e paxilina para avaliar a formação de complexos de adesão; e com anticorpos para Rac1, Cdc42, RhoA e faloidina para avaliar a polimerização de actina, utilizando microscopia confocal. RESULTADOS: Os resultados obtidos revelam um aumento da migração de células dendríticas após a infecção por L. infantum selvagem. Entretanto, observa-se uma redução da migração de células dendríticas após a infecção por L. infantum nocaute para o gene lpg2, em comparação àquelas infectadas com o parasito selvagem. Os resultados mostram ainda um aumento da formação de complexos de adesão e da polimerização de actina em células dendrítica infectadas por L. infantum selvagem. Entretanto, observa-se um aumento da migração de macrófagos após a infecção por L. infantum nocaute para o gene lpg2, em comparação àquelas infectadas com o parasito selvagem. Os resultados mostram ainda um aumento da formação de complexos de adesão em macrófagos infectados por L. infantum selvagem e por parasitos nocaute para o gene lpg2. Adicionalmente, foi observado uma redução da marcação de faloidina e Rac1 nas células infectadas por L. infantum selvagem e pelo parasito nocaute para o gene lpg2, em comparação as células não infectadas. Além disso, foi observado um aumento da expressão de RhoA nas células infectadas pela L. infantum selvagem, em relação a células não infectadas. Entretanto observa-se uma redução da expressão de RhoA em macrófagos infectados por L. infantum nocaute para o gene lpg2, em comparação as células infectadas com o parasito selvagem. CONCLUSÕES: Os dados apresentados neste trabalho sugerem que o LPG de L. infantum apresenta um papel importante na modulação da migração de células hospedeiras humanas infectadas. Experimentos adicionais são importantes para confirmação e melhor entendimento do papel do LPG na migração de células infectadas por L. infantum.
Abstract
INTRODUCTION: Leishmaniasis is a zoonosis caused by the protozoan parasite Leishmania ssp., which presents different clinical manifestations such as cutaneous leishmaniasis and visceral leishmaniasis. The dissemination and homing of infected cells containing Leishmania antigens are crucial for the survival of the parasite inside the host and the establishment of infection. In addition to host factors, parasite factors are also important components for disease development. Recent studies have already demonstrated the relevance of LPG from Leishmania in host-parasite interaction, parasite survival inside the host, and the establishment of the infection. However, the role LPG plays in the migration and adhesion of human host cells is unknown. AIM: Thus, the main goal of this work is to evaluate the role of LPG in the adhesion and migration of human host cells infected by L. infantum. MATERIAL AND METHODS: For this, human dendritic cells and macrophages obtained from healthy donors were cultivated and infected by wildtype L. infantum or parasites knockout for the lpg2 gene and submitted to migration using a transwell system. Additionally, we evaluated the formation of adhesion complexes through p-FAK and p-paxillin expression, the polymerization of the actin by phalloidin, and essential proteins in this process such as Cdc42, Rho and Rac-1, using confocal microscopy. RESULTS: Our results show an increase in the migration of dendritic cells after infection by wildtype L. infantum. However, there was a reduction in the migration of dendritic cells infected by L. infantum lpg2 knockout when compared to those infected with the wildtype parasites. We also showed an increase in the adhesion complexes formation and polymerization of the actin cytoskeleton in dendritic cells infected by wildtype L. infantum when compared to those infected with the lpg2 knockout parasites. On the other hand, we found a reduction in the migration of macrophages infected by wildtype L. infantum. However, there was an increase in the migration of macrophages infected by L. infantum lpg2 knockout when compared to those infected with the wildtype parasites. Also, we found an increase in the adhesion complexes formation in macrophages infected by wildtype L. infantum and parasites lpg2 knockout. We also show a reduction in phalloidin and Rac1 expression in macrophages infected by wildtype L. infantum and lpg2 knockout parasites compared to noninfected cells. We also found an increase in RhoA expression in macrophages infected by wild-type L. infantum compared to uninfected cells. However, there was a reduction in RhoA expression in macrophages infected by lpg2 knockout parasites when compared to those infected by the wildtype parasites. CONCLUSIONS: In conclusion, our results suggest that LPG from L. infantum is important for the modulation induced by these parasites in human host cells. Further experiments should be performed to confirm and better understand LPG's role in host cell migration during L. infantum infection.
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