Avaliação de antígenos quiméricos do Trypanosoma cruzi para diagnóstico da doença de Chagas em bancos de sangue

Abstract

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas (DC) está entre as dez principais causas de inaptidão para doação de sangue. Os hemocentros utilizam testes para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi através de métodos imunoenzimáticos (ELISA) ou quimiluminescentes, sendo obrigatória a realização de ensaios de alta sensibilidade, os quais podem levar a resultados falso-positivos. Uma alternativa para ultrapassar este obstáculo baseia-se na utilização de proteínas recombinantes quiméricas, elevando a especificidade sem, contudo, reduzir a sensibilidade. Recentemente quatro proteínas quiméricas (IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4) foram sintetizadas e avaliadas em estudos de fase I e II, sendo demonstrados elevados valores de desempenho e baixos índices de reatividade cruzada. OBJETIVO: Avaliar a utilização dos antígenos quiméricos IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 do T. cruzi para a triagem sorológica da DC em bancos de sangue. MATERIAL E MÉTODOS: Os antígenos foram expressos através da clonagem em vetor pET28a e expressão em E. coli BL21-Star. Um total de 5.014 foram obtidas de doadores da Fundação HEMOBA. As placas de ELISA foram sensibilizadas utilizando as moléculas IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4, separadamente, como antígeno de captura. A análise de classe latente (LCA) foi utilizada para definição da condição sorológica para a DC das amostras inscritas no estudo. Trata-se de uma ferramenta estatística utilizada para avaliar ensaios diagnósticos para doenças que não possuem testes de referência. Em seguida, o potencial diagnóstico de cada molécula foi validado através de curvas ROC e o desempenho dos testes determinado através de tabelas de dupla entrada. RESULTADOS: Do total de amostras analisadas, a LCA classificou 4.993 (99,6%) amostras como negativas e 21 (0,4%) como positivas. Os valores da área abaixo da curva variaram de 99.3% a 100% para todas as moléculas IBMP. A acurácia variou de 99,9% a 100%. A sensibilidade foi de 85,7%, 90,4%, 95,2%, 99,9% para dos antígenos IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4, respectivamente, enquanto a especificidade foi de 100% para IBMP-8.1 e IBMP-8.2, 99,9% e 100% para as moléculas IBMP-8.3 e IBMP-8.4. Do total de amostras positivas para a DC, seis apresentaram coinfecção para outras doenças infecto-parasitárias como: HTLV, sífilis, HCV e HBC. Não houve reatividade cruzada para nenhum dos quatro antígenos. CONCLUSÃO: O uso de antígenos quiméricos é uma alternativa para reduzir o número de bolsas descartadas indevidamente por apresentarem resultado falso-positivo, em virtude da elevada sensibilidade dos testes, reatividade cruzada bem como na redução dos custos para a realização da triagem sorológica das bolsas coletadas.