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WOLBACHIA (RICKETTSIALES: RICKTTSIACEAE) EM MARUINS DO GÊNERO CULICOIDES E LEPTOCONOPS (DIPTERA: CERATOPOGONIDAE) COLETADOS NOS ESTADOS DO AMAZONAS E PARÁ.
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Abstract in Portuguese
A família Ceratopogonidae é composta de pequenos dípteros Culicomorpha, que medem de 1 a 6 mm de comprimento, com corpos esguios a moderadamente robustos. Algumas espécies dessa família são hematófagas e conhecidas vulgarmente no Brasil como maruins, mosquitinhos pólvora e mosquitinhos de mangue. Wolbachia sp. são um gênero de bactéria endossimbiótioca, gramnegativa intracelular obrigatória de transmissão materna, que infecta os artrópodes e nematóides filarias em todo o mundo e são conhecidos por terem efeitos epidemiológico importantes na biologia de seus hospedeiros. Até o momento, esse trabalho abordou a detecção e caracterização de Wolbachia sp. em espécimes da família Ceratopogonidae com importância médica e veterinária na América do Sul, por este fato, um estudo com levantamento de cepas de Wolbachia sp. O objetivo deste trabalho foi detectar e caracterizar Wolbachia sp. em ceratopogonideos hematófagos do Amazonas e Pará. Usando um total de 17 ensaios de PCR de detecção de Wolbachia de baixa especificidade e sequenciamento de Sanger foram rastreados os extratos de DNA de 15 espécies de Ceratopogonideos para a presença de Wolbachia. As pesquisas do BLAST revelaram que oito dos 48 produtos de PCR amplificados na triagem inicial de PCR eram de origem Wolbachia e das sequências de genes alvo. Quatro dessas sequências foram amplificadas de Culiciodes phlebotomus; a análise filogenética de cada uma das sequências de genes individualmente (nouG, dnaA, aspC e WD 0198) colocou essas sequências em grupos suportados por bootstrap com super clado B de Wolbachia, alterando essas sequências todas derivadas de uma única cepa de Wolbachia chamada wCphl. Duas sequências de genes do supergrupo B (atpD e coxA) também foram amplificadas de C. leopoldoi, essas duas sequências também são consideradas derivadas da mesma cepa de Wolbachia, que denominamos de wCleo. A análise filogenética com as duas sequências de genes amplificadas de uma extração de DNA de Culicoides pseudodiabolicus (ftsZ e nouG) sugeriu que eles pertencem ao mesmo supergrupo de Wolbachia que wCfeJ, a cepa de Wolbachia recentemente encontrada infectando pulgas de gato. A triagem não apresentou evidências de infecções por Wolbachia em qualquer uma das outras 13 espécies de Ceratopogonidae testadas para este estudo. É importante ressaltar que nossos resultados sugerem que todos os três vetores da doença Culicoides que testamos (C. insignis, C. foxi, C. paraensis, C. phlebotomus) são livres de wolbachia.
Abstract
The family Ceratopogonidae is composed of small Culicomorpha Diptera, measuring 1 to 6 mm in length, with slender to moderately robust bodies. Some species of this family are hematophagous and commonly known in Brazil as maruins, gunpowder mosquitoes and mangrove mosquitoes. Wolbachia sp. are a genus of endosymbiotic bacteria, obligate intracellular gram-negative of maternal transmission, which infects filarial arthropods and nematodes worldwide and which are known to have epidemiologically important affects on the biology of their hosts. So far, no work has addressed the detection and characterization of Wolbachia sp. in specimens of the family Ceratopogonidae with medical and veterinary importance in South America, for this fact, a study with a survey of strains of Wolbachia sp. The objective of this work was to detect and characterize Wolbachia sp. in anthropophilic ceratopogonids from the Amazonas e Pará. Using a total of 17 low-specificity Wolbachia-detecting PCR assays and Sanger sequencing, I screened DNA extracts from 15 species of Ceratopogonids for the presence Wolbachia. BLAST searches revealed that 8 of the 48 PCR products amplified in our initial PCR screening were of Wolbachia origin and from the targeted gene sequences. Four of these sequences were amplified from Culiciodes phlebotomus; phylogenetic analysis with each of the gene sequences individually (nouG, dnaA, aspC and WD 0198) placed these sequences in bootstrap supported groups with super clade B of Wolbachia, suggesting these sequences all derive from a single Wolbachia strain named wCphl here. Two supergroup B gene sequence (atpD and coxA) were also amplified from C. leopoldoi, these two sequences are also presemued derive from the same wolbachia strain, which we have named here wCleo. Phylogenetic analysis with the two gene sequences amplified from a DNA extraction of Culicoides pseudodiabolicus (ftsZ and nouG) suggested that they belong to the same supergroup of Wolbachia as wCfeJ, a Wolbachia strain recently found infecting cat fleas. My screening failed to provide evidence of wolbachia infections in any of the other 13 species of Ceratopogonidae species tested for this study. Importantly, our results suggest that all three of culiciodes disease vectors that we tested (C. insignis, C. foxi, C. paraensis, C. phlebotomus) were wolbachia-free.
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