Estudo in vitro dos mecanismos celulares e imunológicos associados à neuropatogênese da infecção pelo vírus Zika

Abstract

O objetivo do presente trabalho foi avaliar os mecanismos imunológicos e de morte celular desencadeados na infecção pelo ZIKV nas células humanas de linhagem neuronal SH-SY5Y. A caracterização da infecção pelo ZIKV nessas células indica que a progressão da infecção induz a morte de células SH-SY5Y com ativação de caspases e essa morte está associada à produção de mediadores inflamatórios CXCL-10, CCL2, CCL5, IL-8 e IL-6, como observado por dados de qPCR e citometria de fluxo. Esse processo de morte celular envolve a ativação de estresse de retículo endoplasmático e também a ativação da via intrínseca de apoptose com redistribuição intracelular de fatores mitocondriais, observado por análises de citometria de fluxo, microscopia de fluorescência e Western Blot. Em seguida, verificamos se há a ativação das vias dos receptores de morte na infecção através da análise de expressão dos ligantes de morte TRAIL, FasL e TNF-α. Observamos que não há detecção da expressão gênica de TRAIL e FasL, e que embora haja altos níveis do transcrito TNF em células infectadas, a síntese de TNF-α é dispensável para a indução de morte de células SH-SY5Y, já que o tratamento com pentoxifilina não inibiu a morte celular. Por fim, verificamos se o estresse causado por radicais livres estaria envolvido nesse processo através do tratamento de células infectadas com o antioxidante N-acetil-cisteína (NAC) e com o inibidor da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) 1400W. Embora NAC não tenha alterado os níveis de morte celular, a inibição de iNOS reverteu parcialmente a morte celular na infecção pelo ZIKV, sugerindo que essa enzima contribui para esse processo. Em suma, os resultados do presente estudo sugerem que: a infecção pelo ZIKV em células SH-SY5Y ativa a via intrínseca de apoptose; a morte de células SH-SY5Y não é dependente da síntese TNF-α; atividade da iNOS contribui para morte de células SH-SY5Y na infecção pelo ZIKV .