Aplicação do diagnóstico molecular para caracterização dos pacientes envolvidos no surto de doença de Chagas em Pernambuco

Abstract

O presente trabalho avaliou a aplicabilidade da técnica de PCR em tempo real (qPCR) para diagnóstico da doença de Chagas (DC) aguda em amostras de 77 indivíduos expostos ao surto ocorrido em Pernambuco, relacionando os resultados obtidos aos dos métodos diagnósticos para esta fase da infecção. Inicialmente realizou-se o desenvolvimento de sistemas de primers para o DNA do cinetoplasto (kDNA) e nuclear (SAT-DNA) de Trypanosoma cruzi (T. cruzi), e avaliação dos sistemas TCZ (MOSER et al., 1989) e Cruzi (PÍRON et al., 2007), preditos na literatura. Os sistemas TcB-IAM e CzB-IAM foram desenhados para o kDNA e, para o SAT-DNA, o TcSAT-IAM. O TcSAT-IAM e o Cruzi apresentaram limite de detecção de 1fg do DNA alvo. Segundo critérios da Secretaria Estadual de Saúde de Pernambuco (SES/PE), 39 casos foram registrados, sendo 28 pelo critério laboratorial e 11 pelo clínico-epidemiológico. Amostras de sangue dos 77 indivíduos foram submetidas à qPCR por ambos sistemas, alcançando concordância de 89,61% entre eles. Após análises entre sistemas e critérios da SES/PE, o TcSAT-IAM apresentou sensibilidade e especificidade de 53,85% (IC 38,57-68,43) e 94,74% (IC 82,71- 98,54), respectivamente, acurácia de 74% e concordância moderada; para o sistema Cruzi a sensibilidade e a especificidade foram de 48,72% (IC 33,86-63,8) e 89,47% (IC 75,87-95,83), respectivamente, , com acurácia de 68,83%, tendo concordância razoável. O sistema TcSAT-IAM apresentou acurácia de 72,58% e 75% em relação aos testes parasitológicos e sorológicos (IgM anti-T. cruzi), respectivamente. Todos os casos foram acompanhados pelo TcSAT–IAM em 3 coletas pós-tratamento, demonstrando negativação da carga parasitária. Os dados demonstram a importante da coleta amostral prévia ao tratamento e do desenvolvimento de um padrão-ouro composto, no qual os dados da qPCR sejam considerados junto aos dos testes parasitológicos e sorológicos. Destaca-se a relevância da técnica molecular para um diagnóstico rápido e preciso .