Avaliação da resposta imune humoral produzida contra a proteína do circunsporozoíto (CSP) de Plasmodium falciparum associados à esporos de Bacillus subtilis

Abstract

Atualmente, ainda não existe vacina para malária com capacidade de gerar uma proteção com alta eficácia, sendo as formulações que contêm a proteína de superfície de circunsporozoíto (PfCSP) as mais avançadas nos estudos em humanos. Uma etapa importante no desenvolvimento de uma vacina, além da identificação do antígeno, é avaliar como este será apresentado, bem como o efeito imunoestimulatório dos componentes da formulação (imunoestimulantes). Os esporos de Bacillus subtilis têm sido avaliados há duas décadas como partículas vacinais adjuvantes, as quais promovem a elevação da resposta humoral após a coadministração com antígenos tanto acoplados ou integrados à sua superfície. Logo, somando as características imunoestimulantes, probióticas e de alta resistência dos esporos com a grande capacidade de estimular uma resposta humoral protetora da PfCSP, este trabalho buscou investigar em modelo murino a possível utilização deste método como uma nova formulação de adjuvante para uma vacina contra malária. Para tanto, duas abordagens de apresentação foram testadas: acoplando a PfCSP recombinante (rPfCSP, produzida em Escherichia coli) na superfície dos esporos e recombinando o B. subtilis de modo a expressar o antígeno na superfície de seus esporos. Com as ferramentas produzidas, camundongos Balb/c foram imunizados via intranasal, sendo a resposta imune humoral (IgG total e subclasses) acompanhada por ELISA indireto. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que a proteína rPfCSP foi produzida com êxito no sistema de expressão usando E. coli como hospedeiro, no qual estava presente porção solúvel do lisado bacteriano. As imunizações por via intranasal utilizando a rPfCSP acoplada aos esporos revelaram que estes podem estimular uma maior produção de anticorpos, mais rápida e por um período mais longo contra o antígeno rPfCSP quando comparada ao grupo estimulado apenas com a proteína recombinante. Além disso, foi observada uma resposta imune de perfil balanceado Th1/Th2 após análise do perfil de produção das subclasses. A recombinação da proteína PfCSP em B. subtilis foi obtida com sucesso, esta foi expressa na superfície dos esporos pelo endereçamento obtido com fusão à proteína C de revestimento do esporo( CotC), no qual não foram observadas clivagens do antígeno-alvo nos imunoensaios realizados, indicandoque esta não sofreu ação das proteases ainda presentes no hospedeiro utilizado. Os esporos de B. subtilis recombinados com PfCSP foram capazes de induzir uma resposta imune por via intranasal com níveis de IgG elevados que se mantiveram circulantes por 150 dias, apresentando um perfil de resposta imune predominante Th1. Este foi o primeiro estudo que buscou avaliar o potencial uso de esporos de B. subtilis como adjuvante de um antígeno candidato vacinal para malária. Os resultados promissores aqui obtidos podem reacender o interesse no potencial uso da via de mucosa, como forma não invasiva para obtenção de proteção contra a esta doença