Vigilância epidemiológica em tempo real de bactérias causadoras de ist a partir de material clínico por qpcr-hrm

Abstract

As infecções sexualmente transmissíveis (IST) são doenças transmitidas por via sexual, ou seja, por relações sexuais sem o uso de preservativos. Diferentes agentes etiológicos podem causar IST, apresentando diferentes sintomas, como feridas, verrugas, disúria, corrimento, abortos, etc. Entre as IST causadas por bactérias, a gonorréia causada pela Neisseria gonorrhoeae, é uma das mais frequentes no mundo, com 78 milhões de pessoas infectadas por ano. No Brasil não é diferente, no entanto como apenas os casos de HIV e de sífilis são notificados obrigatoriamente ao Ministério da Saúde, é difícil ter estatísticas fidedignas sobre as outras ISTs. Os dados relativos desta infecção costumam vir de clínicas, programas de rastreio ou estudos epidemiológicos específicos. Segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), as IST constituem os cinco tipos de doenças para as quais os adultos mais procuram ajuda médica. IST como a gonorréia podem causar danos fetais e neonatais, neoplasia genital e infertilidade. Existem testes e diagnósticos de qualidade variável disponíveis em clínicas particulares e hospitais públicos para a detecção do agente etiológico causador da gonorréia. Além do diagnóstico clínico e laboratorial, a determinação da susceptibilidade aos antimicrobianos pelo TSA também é primordial para o sucesso do tratamento. O TSA pode ser apenas qualitativo ou quantitativo pela determinação de concentração inibitória mínima ou CIM. Em ambos os casos é preciso cultivar a bactéria que precisa estar viável e pura para realização do teste. A N. gonorrhoeae é uma bactéria em forma de cocos, Gram negativa e considerada fastidiosa, isto é, de difícil cultivo. Os novos métodos de diagnóstico molecular baseados na PCR nos permitem a detecção do DNA genômico deste agente diretamente do material clínico (geralmente secreção uretral) e também de genes associados à resistência microbiana também por PCR convencional ou PCR em tempo real (qPCR) com uso de sondas (Taqman). O presente projeto propõe a utilização do PCR em tempo real com HRM (qPCR-HRM) para diagnóstico do agende etiológico e para detecção de genes associados a resistência microbiana. Além de possibilitar a detecção da resistência aos antibióticos de escolha diretamente a partir do material clínico, a qPCR-HRM apresenta um custo benefício bastante alto, pois é um método rápido, com alta sensibilidade e especificidade (similar ao Taqman) e custo menor por não utilizar sondas.