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Title: Padronização do Kit de ELISA Recombinante para o diagnóstico da doença de Chagas visando sua utilização nos Serviços de Hemoterapia
Advisor: Nascimento, Hilton Jorge
Gomes, Yara Miranda
Members of the board: Ferreira, José Antonio Pinto de Sá
Krieger, Marco Aurélio
Gonçalves, Neiva Sellan Lopes
Authors: Mello, Marcelle Bral de
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: Bio-Manguinhos produz, desde a década de 80, Kits para diagnóstico, inclusive para o diagnóstico da doença de Chagas. O kit EIE-Recombinante-Chagas, que utiliza na sua composição as proteínas recombinantes CRA e FRAdo T. cruzi, foi registrado como produto junto à ANVISA no ano de 1999. No período de renovação do registro, o Kit passou por uma avaliação prévia no INCQS, onde não foi possível alcançar condição satisfatória quanto aos níveis de sensibilidade. O presente trabalho teve por objetivo retomar a padronização deste Kitno âmbito do desenvolvimento tecnológico. Para tanto foi estabelecido a padronização de três modelos de protótipos, utilizando variações das construções disponíveis das proteínas recombinantes CRA e FRA, na forma de apresentação como antígeno e como conjugado. Posteriormente, foi avaliado o desempenho de cada protótipo, em três diferentes fases. Na primeira fase, o melhor desempenho foi apresentado pelo protótipo 3, cujos níveis de sensibilidade e especificidade foram respectivamente de 99% e 99,5% (IC 95%). Na segunda fase o nível de sensibilidade do protótipo 3 foi de 95.8% e o de especificidade 100%, mantendo a melhor condição de desempenho em relação aos demais. Na última fase, somente o protótipo 3 foi avaliado em função da indisponibilidade de volume das amostras selecionadas e os níveis de sensibilidade e especificidade encontrados de 100%.O desempenho do protótipo 2 foi insatisfatório nas duas primeiras fases de avaliação.Tendo em vista o bom desempenho alcançado pelo protótipo 3, propomos a continuação deste modelo na elaboração futura de lotes-piloto, de estudos multicêntricos e de validação, em ações conjuntas com o controle e a garantia da qualidade para a elaboração de documentação visando pedido de registro desse produto junto aos órgãos regulatórios.
Abstract: Bio-Manguinhos produces, since the 80’s, a variety of kits for diagnosis, including the kit for Chagas’ disease diagnostic. The EIE-Recombinant-Chagas’ kit, which has in its constitution the recombinant proteins CRA and FRA from T. cruzi, was registered at ANVISA as a product in 1999. During the renewal of the registration period, the kit was submitted to a previous registration analysis by The National Institute for Quality Control in Health (INCQS), when it did not show satisfactory sensitivity levels. The present work aimed to remake the kit standardization process under the scope of the technological development. In order to do it, we established the standardization of three prototype models, each one using variations of available constructions from CRA and FRA recombinant proteins in the form of presentation as antigen and as conjugate. Afterwards, we evaluated the performanceof each prototype, in three different stages. In the first one, prototype 3 showed the best performance with 99% sensitivity and 99.5% specificity levels (CI 95%). In the second stage, prototype 3 levels sensitivity and specificity were 95.8% and 100% respectively, keeping the best performance condition as compared to the other two prototypes. In the last stage, only prototype 3 was assessed due to the lack of sample volumes. The reported sensitivity and specificity levels forsuch prototype were equal to 100%. The performance of prototype 2 was unsatisfactory in the first two assessment stages. Taking into account the performance achieved by prototype 3, we propose the continuation of this model for future development of pilot lots, multicenter and validation studies, in joint actions with quality assurance and quality control for the arrangement of the documents requested by the National Regulatory Agency for the registration of the product.
Keywords: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Chagas Disease
Hemotherapy Service
keywords: Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
Doença de Chagas
Serviço de Hemoterapia
DeCS: Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
Doença de Chagas
Serviço de Hemoterapia
Issue Date: 2009
Publisher: Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos.
Citation: MELLO, Marcelle Bral de. Padronização do Kit de ELISA Recombinante para o diagnóstico da doença de Chagas visando sua utilização nos Serviços de Hemoterapia. 2009. 122 f. Dissertação (Mestrado Profissional em Tecnologia de Imunobiológicos) – Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos, em parceria com o Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2009.
Date of defense: 2009
Place of defense: Rio de Janeiro / RJ
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos.
Program: Pós-graduação em Biologia Celular. Molecular eMestrado Profissional em Tecnologia de Imunobiológicos.
Copyright: open access
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