Please use this identifier to cite or link to this item:
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/59638
COLORIMETRIC MICROWELL PLATE REVERSE-HYBRIDIZATION ASSAY FOR MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS DETECTION
Molecular diagnosis
Diagnostic-accuracy
Cost-effectiveness
Molecular diagnosis
Tuberculosis
Acid amplification tests
Polymerase-chain-reaction
Author
Michelon, Candice Tosi
Rosso, Franciele
Schmid, Karen Barros
Sperhacke, Rosa Dea
Oliveira, Martha Martha
Kritski, Afrânio Lineu
Rezende, Leonides
Costa, Elis Regina Dalla
Ribeiro, Andrezza Woloski
Verza, Mirela
Cafrune, Patrícia Izquierdo
Silva, Márcia Susana Nunes
Kuhleis, Daniele
Zaha, Arnaldo
Rossetti, Maria Lucia Rosa
Rosso, Franciele
Schmid, Karen Barros
Sperhacke, Rosa Dea
Oliveira, Martha Martha
Kritski, Afrânio Lineu
Rezende, Leonides
Costa, Elis Regina Dalla
Ribeiro, Andrezza Woloski
Verza, Mirela
Cafrune, Patrícia Izquierdo
Silva, Márcia Susana Nunes
Kuhleis, Daniele
Zaha, Arnaldo
Rossetti, Maria Lucia Rosa
Affilliation
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Rio Grande, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Universidade de Caxias do Sul. Laboratório de Pesquisa em HIV/AIDS. Caxias do Sul, RS, Brazil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Faculdade de Medicina. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Faculdade de Medicina. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Ampligenix Biotech. Belo Horizonte, MG, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande Do sul, Brazil
Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde, Brazil / Universidade Luterana do Brasil, Brazil
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Porto Alegre, RS, Brazil.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Porto Alegre, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Rio Grande, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Universidade de Caxias do Sul. Laboratório de Pesquisa em HIV/AIDS. Caxias do Sul, RS, Brazil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Faculdade de Medicina. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Faculdade de Medicina. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Ampligenix Biotech. Belo Horizonte, MG, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil.
Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande Do sul, Brazil
Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde, Brazil / Universidade Luterana do Brasil, Brazil
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Porto Alegre, RS, Brazil.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Porto Alegre, RS, Brazil.
Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em Saúde. Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. Porto Alegre, RS, Brazil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract
Direct smear examination using Ziehl-Neelsen staining for pulmonary tuberculosis (PTB) diagnosis is inexpensive and easy to use, but has the major limitation of low sensitivity. Rapid molecular methods are becoming more widely available in centralized laboratories, but they depend on timely reporting of results and strict quality assurance obtainable only from costly commercial kits available in high burden nations. This study describes a pre-commercial colorimetric method, Detect-TB, for detecting Mycobacterium tuberculosis DNA in which an oligonucleotide probe is fixed onto wells of microwell plates and hybridized with biotinylated polymerase chain reaction amplification products derived from clinical samples. The probe is capable of hybridising with the IS6110 insertion element and was used to specifically recognise the M. tuberculosis complex. When combined with an improved silica-based DNA extraction method, the sensitivity of the test was 50 colony-forming units of the M. tuberculosis reference strain H37Rv. The results that were in agreement with reference detection methods were observed in 95.2% (453/476) of samples included in the analysis. Sensitivity and specificity for 301 induced sputum samples and 175 spontaneous sputum samples were 85% and 98%, and 94% and 100%, respectively. This colorimetric method showed similar specificity to that described for commercially available kits and may provide an important contribution for PTB diagnosis.
Keywords
Extrapulmonary tuberculosisMolecular diagnosis
Diagnostic-accuracy
Cost-effectiveness
Molecular diagnosis
Tuberculosis
Acid amplification tests
Polymerase-chain-reaction
Share