Ensaio funcional de internalização de formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi por leucócitos do sangue periférico humano para avaliação de substâncias potencialmente ativas contra a doença de Chagas

Abstract

A necessidade da descoberta e desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento da doença de Chagas é de grande importância devido à alta toxicidade e baixa eficácia de cura na fase crônica das drogas utilizadas para o tratamento clínico dessa doença. Outras abordagens quimioterapêuticas para o tratamento da doença de Chagas estão sendo pesquisadas e requerem ensaios de triagem apropriados para avaliação de sua efetividade. Assim, este estudo tem como objetivo padronizar ensaio funcional preditivo utilizando a internalização de formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi por leucócitos do sangue periférico humano e análise simultânea de citotoxicidade por citometria de fluxo. Essa abordagem permitirá a avaliação do potencial anti-T. cruzi e imunotóxico de novos compostos e produtos naturais, com vistas ao estabelecimento de metodologias preditivas úteis para a descoberta de novos fármacos para tratamento da doença de Chagas. A proposta desta metodologia é ser utilizada como ensaio preditivo/confirmatório (para uma triagem secundária após identificação de compostos bioativos em ensaios convencionais), de compostos em potencial para seguirem no fluxograma de desenvolvimento de um novo quimioterápico para doença de Chagas. Neste estudo, foi utilizado o sangue periférico de 15 voluntários saudáveis que foi incubado por 6 horas na presença/ausência de formas epimastigotas de T. cruzi marcadas com fluoresceína, na ausência/presença dos fármacos tripanomicidas, como benzonidazol 100 μM, ravuconazol 10 μM e posaconazol 100 μM. O sobrenadante das culturas foi utilizado para quantificar citocinas (IL-1-β, IL-6 TNF e IL-10) e quimiocinas (CCL2, CCL5 e CXCL8). Os dados obtidos demonstraram que houve redução da capacidade de internalização de formas epimastigotas do T. cruzi na presença de ravuconazol, demonstrando sua potencial atividade anti-T. cruzi. Além disso, a avaliação do perfil imunomodulador das drogas testadas revelou um perfil pró-inflamatório modulado, em que as citocinas IL-10 e TNF apresentaram maior expressão após a adição dos fármacos, destacando-se uma maior produção de IL-10 na presença de benzonidazol, ravuconazol e posaconazol que por sua vez está associada de forma inversa com a produção de TNF, nessas mesmas condições. A adição de ravuconazol e posaconazol nas culturas induz ainda uma diminuição de CCL2 e aumento de CCL5 em comparação ao perfil apresentado na ausência de fármacos e na presença de benzonidazol. Em suma, o ensaio preditivo inovador proposto pelo estudo pode ser futuramente uma ferramenta útil como um ensaio confirmatório para seleção de compostos mais promissores, identificados em programas de prospecção de novos fármacos para o tratamento da doença de Chagas.