Estudo de variantes de betalactamases ADC de isolados clínicos de Acinetobacter baumannii na resistência aos betalactâmicos

Abstract

Acinetobacter sp. tem emergido como patógeno oportunista em casos de infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) em todo o mundo. Sua emergência tem sido atribuída à resistência intrínseca a diversos antimicrobianos e à capacidade de adquirir mecanismos de resistência aos mesmos. As Acinetobacter-derived cephalosporinases (ADCs) compreendem um grupo de betalactamases capazes de hidrolisar as cefalosporinas e incapazes de hidrolisar os carbapenêmicos. No entanto, mudanças na sua capacidade hidrolítica têm sido associadas a alterações de aminoácidos em regiões específicas da enzima. Recentemente, a variante ADC-68 foi caracterizada com atividade contra carbapenêmicos, além das cefalosporinas de terceira e quarta geração. Em estudo realizado no Instituto Aggeu Magalhães, foram identificadas variantes de ADC com substituições de aminoácidos similares às descritas na ADC-68 em isolados de A. baumannii oriundos de infecções em pacientes hospitalizados na cidade do Recife e Caruaru. O objetivo deste estudo foi investigar a capacidade dessas variantes de ADC em hidrolisar os carbapenêmicos, bem como identificar os principais motivos envolvidos com a resistência aos carbapenêmicos e demais betalactâmicos. As variantes enzimáticas foram clonadas em vetor de expressão pET28a(+) e expressas em E. coli BL21(DE3). O perfil de sensibilidade de E. coli BL21(DE3) transformantes aos betalactâmicos foi determinado por microdiluição e testes de hidrólise enzimática. A fim de investigar demais substituições de aminoácidos envolvidas com a ampliação do espectro hidrolítico de ADC, as variantes enzimáticas foram modificadas com motivos próprios de ADC-68 por mutagênese sítio-dirigida e avaliadas quanto a sua capacidade de causar resistência aos betalactâmicos e docking molecular. Os resultados demonstraram que as ADCs avaliadas nesse estudo possuem atividade de ESBL e carbapenemase, além da identificação de substituições isoladas e simultâneas de aminoácidos que alteram parcialmente ou completamente o perfil de hidrólise destas ao imipenem e demais betalactâmicos.