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LABORATORY VALIDATION OF LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP) ASSAY FOR LIMNOPERNA FORTUNEI (DUNKER 1857) DETECTION.
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Affilliation
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Morfologia. Belo Horizonte, MG, Brazil/Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Biotecnologia Aplicada a Patógenos. Belo Horizonte, MG, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Entomologia e Núcleo de Bioinformática. Recife, PE, Brazil
Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Morfologia. Belo Horizonte, MG, Brazil/Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Genética, Ecologia e Evolução. Belo Horizonte, MG, Brazil
Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil/Universidade do Estado de Minas Gerais. Escola de Design. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Morfologia. Belo Horizonte, MG, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Biotecnologia Aplicada a Patógenos. Belo Horizonte, MG, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Entomologia e Núcleo de Bioinformática. Recife, PE, Brazil
Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Morfologia. Belo Horizonte, MG, Brazil/Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Genética, Ecologia e Evolução. Belo Horizonte, MG, Brazil
Centro de Bioengenharia de Espécies Invasoras de Hidrelétricas. Belo Horizonte, MG, Brazil/Universidade do Estado de Minas Gerais. Escola de Design. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Morfologia. Belo Horizonte, MG, Brazil
Abstract
Among the invasive species known to occur in South America is the bivalve mollusc Limnoperna fortunei, whose presence is linked to several environmental and economic problems. Early detection and mitigation actions are needed to limit its impact in the remaining L. fortunei-free areas. PCR-based molecular methods have become the gold standard methodology for L. fortunei detection. However, PCR-based methods require complex logistics from field sampling to laboratory processing. Thus, the use of methods that can be directly applied in the field can speed up the detection process. This work aimed to establish, for the first time, the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for the detection of L. fortunei, with perspectives for in situ application. A set of primers designed for LAMP was tested for amplification of DNA from L. fortunei adult tissues and environmental samples containing bivalve larvae. The test showed a limit of detection as low as 0.01 ng of DNA obtained from adult tissue samples and a minimum reaction time of 60 min. The set of primers used seems to be specific for L. fortunei, since there was no cross-amplification with other bivalve or invasive molluscs that co-occur with the golden mussel in the same environment. The LAMP technique also proved to be efficient in amplifying DNA derived from L. fortunei larvae, demonstrating it to be a robust method regarding potential environmental reaction inhibitors. Although the results obtained here were acquired under controlled laboratory conditions, the LAMP method is a promising tool to integrate L. fortunei invasion monitoring protocols.
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