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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60937
DETECÇÃO RÁPIDA E DIFERENCIAÇÃO DE ESPÉCIES DE MICOBACTÉRIAS ATRAVÉS DE UM SISTEMA DE PCR MULTIPLEX
Micobactérias Atípicas
Reação em Cadeia da Polimerase
Diagnóstico
Micobacterias atípicas
Reacción en cadena de la polimerasa
Diagnóstico
Lima, Andrea Santos | Date Issued:
2010
Author
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract in Portuguese
O gênero Mycobacterium é constituído por espécies do complexo Mycobacterium
tuberculosis e outras denominadas micobactérias não tuberculosas (MNT). Nas infecções
causadas por micobactérias, o diagnóstico precoce é essencial para a implementação do
tratamento e cura do paciente. Métodos moleculares têm proporcionado à melhoria
considerável da velocidade e precisão de identificação das micobactérias. Este estudo teve
como objetivo avaliar um sistema PCR Multiplex em diferentes amostras clínicas de pacientes
com tuberculose e micobacterioses, além de cepas de micobactérias isoladas em meio de
cultura para ser proposta como ferramenta auxiliar no diagnóstico diferencial da tuberculose e
doenças causadas por MNT. Foram analisados 40 pacientes com diagnóstico de tuberculose
realizado pelo médico assistente do serviço de saúde, 63,15% do sexo masculino e 36,85% do
feminino. Foram processadas 58 espécimes biológicos de origem pulmonar e extrapulmonar e
as amostras clínicas pulmonares bacíliferas extraídas com Kit QIAamp DNA Mini and Blood
Mini Handbook foram as que amplificaram pelo menos um alvo específico quando utilizamos
a PCR multiplex. Em relação às características fenotípicas e bioquímicas das 40 cepas de
micobactérias, 55% foram caracterizadas como M. tuberculosis, 22,5% como micobactérias
não tuberculosas. Quando comparamos os resultados dos testes fenotípicos e bioquímicos
com a PCR multiplex, observamos 93,3% de concordância nos resultados. Na comparação
dos resultados da PCR multiplex com a técnica de PRA- hsp65 e com o diagnóstico final dos
pacientes, verificamos que houve concordância em 100% e 74,28% dos resultados,
respectivamente. Concluímos que a PCR multiplex poderá ser utilizada como ferramenta
auxiliar no diagnóstico diferencial da tuberculose e das infecções causadas pelas MNT.
Entretanto é de fundamental importância que o diagnóstico diferencial seja baseado na análise
conjunta de vários parâmetros que identifiquem as espécies de MNT.
Abstract
The genus Mycobacterium comprises Mycobacterium tuberculosis complex species and
others called nontuberculous mycobacteria (NTM). In infections caused by mycobacteria,
early diagnosis is essential for the implementation of the treatment and cure. Molecular
methods have provided considerable improvement to the speed and accuracy of identification
of mycobacteria. This study aimed to evaluate a multiplex PCR system in different clinical
samples from patients with tuberculosis and mycobacteria, and mycobacteria strains isolated
in culture medium to be proposed as an auxiliary tool in the differential diagnosis of
tuberculosis and diseases caused by NTM. We analyzed 40 patients diagnosed with
tuberculosis conducted by the attending physician of the health service, 63.15% male and
36.85% female. 58 specimens were processed biological origin of pulmonary and
extrapulmonary clinical samples and extracted with smearpositive Kit QIAamp DNA Mini
and Blood Mini Handbook were used to amplify a specific target at least when using the
multiplex PCR. In relation to phenotypic and biochemical characteristics of 40 strains of
mycobacteria, 55% were characterized as M. tuberculosis, 22.5% as nontuberculous
mycobacteria. When comparing the results of phenotypic and biochemical tests with the
multiplex PCR, we observed 93.3% agreement in results. Comparing the results of multiplex
PCR with the technique of PRA-hsp65 and the final diagnosis of patients, we found that there
was agreement in 100% and 74.28% of the results, respectively. We conclude that the
multiplex PCR could be used as an auxiliary tool in the differential diagnosis of tuberculosis
and NTM infections. However it is of fundamental importance that the differential diagnosis
is based on joint analysis of various parameters to identify the species of NTM.
Keywords in Portuguese
Mycobacterium tuberculosisMicobactérias Atípicas
Reação em Cadeia da Polimerase
Diagnóstico
Keywords in Spanish
Tuberculosis micobacterianaMicobacterias atípicas
Reacción en cadena de la polimerasa
Diagnóstico
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