Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células CHO

Abstract

Neste trabalho foram realizadas a clonagem e a expressão do gene da enzima glucocerebrosidase, utilizada na terapia de reposição enzimática para o tratamento da Doença de Gaucher. Diferentes linhagens derivadas de células CHO (células de ovário de hamster chinês), algumas delas mutantes em enzimas do processo de N-glicosilação, foram utilizadas para a produção da proteína recombinante, fazendo com que esta apresentasse diferentes oligossacarídeos em sua estrutura. Além de diferentes linhagens hospedeiras, foram avaliados diferentes vetores de expressão que resultam em diferentes modos de integração do transgene no genoma celular. Utilizando-se o vetor de integração aleatória pcDNA3.1 e o vetor de integração sítio-dirigida pcDNA5FRT, obtiveram-se menores níveis de expressão quando este último sistema foi utilizado. Foram realizadas análises de imunodetecção e ensaios de atividade enzimática para avaliar a presença da enzima recombinante no sobrenadante de clones obtidos das diferentes linhagens. No entanto, para a maioria dos clones, não se verificou uma relação direta entre os resultados das diferentes análises. Diversos clones foram selecionados por secretarem uma quantidade satisfatória de glucocerebrosidase na sua forma ativa.