Avaliação por planejamento de experimentos dos efeitos da composição do meio de cultura e das variáveis de indução na expressão de pneumolisina de Strepococcus pneumoniae em Escherichia coli

Abstract

Várias doenças graves, incluindo pneumonia, septicemia e meningite são causadas pelo S. pneumoniae. A Organização Mundial de Saúde estima que a pneumonia causa em torno de 1,9 milhões de mortes por ano em crianças menores de cinco anos de idade. Portanto, o desenvolvimento de uma vacina composta por proteínas é uma alternativa para resolver este problema. Para avaliar os efeitos de oito variáveis relacionadas com a composição do meio de cultura e com as condições de indução da expressão de pneumolisina solúvel do S. pneumoniae em E. coli, um desenho fatorial 28-4 foi realizado. A expressão da pneumolisina de forma solúvel foi avaliada pela determinação da atividade hemolítica, e as diferentes condições avaliadas foram comparadas por análise estatística. A condição definida, validada em triplicata, foi de indução da expressão em 0,8 (medido em absorbância 600nm) com 0,1mM IPTG durante 4h a 25°C, em meio com 5g/L extrato de levedura, 5g/L triptona, 10g/L NaCl, 1g/L glicose, com adição de 30µg/mL canamicina e sem glicerol. A atividade hemolítica obtida foi a maior comparada com aquelas dos experimentos iniciais. Assim, a metodologia de planejamento experimental permitiu reduzir os custos operacionais, mantendo a expressão de Ply solúvel em E. coli no nível máximo.