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AVALIAÇÃO DA IMUNORREATIVIDADE DE APTÂMEROS PROTEICOS ESPECÍFICOS CONTRA EPÍTOPOS DE ANTICORPOS NEUTRALIZANTES DO VÍRUS ZIKA
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Abstract in Portuguese
O crescimento vertiginoso de casos de microcefalia nos últimos anos, estãodiretamente relacionados aos casos infecção pelo vírus Zika (ZIKV). Em dissonânciaa sua relevância para a saúde pública, estratégias eficientes de diagnóstico, terapiae prevenção encontram-se escassas. Diante desse cenário, somando-se ainesperada transmissão sexual, faz-se fundamental o direcionamento de esforçostécnico-científicos para o desenvolvimento de soluções. Uma etapa crítica naelaboração de estratégias diagnóstico-terapêuticas efetivas, inclui a identificação ecaracterização de anticorpos neutralizantes de alta afinidade, que podem ser usadosno desenvolvimento de testes sensíveis e específicos para reconhecimento do ZIKVno sêmen e, devido a sua capacidade de bloqueio da infecção, servir comocomponente de uma formulação vacinal. Devido ao custo, dificuldades de produçãoe seleção desses, uma nova ferramenta biofarmacêutica tornou-se notória: osaptâmeros proteicos, moléculas sintéticas cujas propriedades físico-químicas podemser moduladas. O atual projeto, utilizou-se de duas estratégias para a construçãodos aptâmeros, ambas baseadas no parátopo do anticorpo monoclonal (mAb)2A10G6 (pan Flavivírus) frente a um epítopo de anticorpo neutralizante da proteínaE (alça de fusão), visando a detecção da proteína alvo e bloqueio da infecção viral.A primeira geração não demonstrou o comportamento esperado, apresentando-seinsolúvel devido à desestabilização do seu núcleo hidrofóbico. Na segundaplataforma, três aptâmeros foram expressos, purificados e testados através deensaios de termoforese em microescala (MST). Dois deles apresentaram afinidadesna ordem de micromolar e um terceiro em namomolar. Portanto, é possível inferirque o último é um potencial candidato para o diagnóstico de ZIKV em amostras desêmen, sendo necessária a validação através de ensaio de imunoabsorçãoenzimática (ELISA), podendo também servir para o desenvolvimento de umaplataforma vacinal neutralizante.
Abstract
The vertiginous growth of microcephaly cases in recent years, are directly related tocases of Zika virus infection (ZIKV). In dissonance of their relevance to public health,efficient strategies for diagnosis, therapy and prevention are scarce. Faced with thisscenario, adding to the unexpected sexual transmission, it is essential to directtechnical and scientific efforts to develop solutions. A critical step in the developmentof effective diagnostic-therapeutic strategies, includes the identification andcharacterization of high-affinity neutralizing antibodies, which can be used in thedevelopment of sensitive and specific tests for recognition of ZIKV in semen and, dueto its ability to block infection , serve as a component of a vaccine formulation. Due tothe cost, difficulties of production and selection of these, a new biopharmaceuticaltool has become notorious: protein aptamers, synthetic molecules whose physical-chemical properties can be modulated. The current project used two strategies forthe construction of aptamers, both based on the monoclonal antibody (mAb) 2A10G6(pan Flavivirus) against a protein E neutralizing antibody epitope (fusion loop), aimingat the detection of the target protein and blocking viral infection. The first generationdid not demonstrate the expected behavior, being insoluble due to the destabilizationof its hydrophobic nucleus. On the second platform, three aptamers were expressed,purified and tested using microscale thermophoresis (MST) assays. Two of themshowed affinities in the order of micromolar and a third in namomolar. Therefore, it ispossible to infer that the latter is a potential candidate for diagnosis of ZIKV in semensamples, requiring validation through enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),which can also serve to develop a neutralizing vaccination platform
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