Avaliação fenotípica e genotípica de bactérias resistentes às polimixinas isoladas de Swab de cloaca de frangos em granjas do Estado do Rio de Janeiro

Abstract

As polimixinas são classificadas pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como um dos antimicrobianos de maior prioridade na medicina humana. No entanto, com o amplo uso desses antimicrobianos em animais de produção e com o retorno da sua utilização na prática clínica humana, tem sido observado um aumento da resistência a essas drogas, o que é uma questão de grande preocupação. Assim, o presente estudo objetiva caracterizar fenotípica e genotipicamente amostras bacterianas resistentes às polimixinas a partir de “swab” de cloaca de frango. Para obtenção de isolados resistentes às polimixinas, os “swabs” foram semeados em meio de cultura EMB suplementado com 4 μg/mL de sulfato de colistina. As amostras que apresentaram crescimento foram identificadas por MALDI-TOF MS e submetidas ao teste de microdiluição em caldo para a determinação da concentração mínima inibitória. Apenas amostras resistentes (CIM >2 μg/mL) foram selecionadas para o estudo. A susceptibilidade a 18 antimicrobianos foi avaliada por disco difusão em ágar. Variantes alélicas do gene mcr foram pesquisadas por PCR e a determinação da diversidade genética foi realizada por PFGE. Por fim, ensaios de conjugação foram desenvolvidos para avaliação da transferência de genes de resistência às polimixinas. Das 125 amostras que cresceram no meio seletivo, 87 (69,6%) foram consideradas resistentes à polimixina, apresentando CIM que variaram de 8 μg/mL a 64 μg/mL, com CIM50= 16 μg/mL e CIM90 = 32 μg/mL. 99% (124/125) das amostras foram identificadas como Escherichia coli e 1% (1/125) como Klebsiella pneumoniae. As maiores taxas de resistência encontradas foram para o ácido nalidíxico (60,9%) e tetraciclina (58,6%). As menores taxas de resistência foram observadas para a cefoxitina (1,1%), tigeciclina (3,4%) e cloranfenicol (5,7%). 75% dos isolados foram considerados MDR. O gene mcr-1 foi identificado em 99% (86/87) dos isolados bacterianos e o mcr-5 em 1% (1/87). As demais variantes não foram detectadas em nenhuma das amostras. O ensaio de conjugação demonstrou capacidade de mobilização de plasmídeos contendo o gene mcr-1. A análise do perfil clonal das nossas amostras permitiu observar uma grande diversidade genética, não havendo um clone prevalente entre as amostras. A alta prevalência de resistência às polimixinas e a presença de gene mcr em amostras isoladas de frangos alertam para a necessidade de identificação de amostras abrigando o gene mcr, com o objetivo de monitoramento da resistência antimicrobiana e de prevenção à disseminação desses microrganismos.