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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/62674
AVALIAÇÃO DA VARIABILIDADE GÊNICA DE MÚLTIPLOS PARÁLOGOS DA PROTEÍNA DE VIRULÊNCIA GP63 DE LEISHMANIA BRAZILIENSIS
Brito, Adriana Neuman Albuquerque Lins Moura de | Date Issued:
2019
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz, Institudo Aggeu Magalhães, Recife, PE, Brasil.
Abstract in Portuguese
Ao longo da sua evolução as espécies de Leishmania desenvolveram métodos deescape do sistema imune dos hospedeiros. Um dos principais mecanismos de escapeé mediado pela proteína de virulência GP63, que possui uma diferença significativana quantidade de genes que a codificam, em diferentes espécies de Leishmania.Dentre as principais espécies patogênicas, a L. braziliensis possui o maior número degenes codificantes (39), quando comparada a L. infantum (7) e L. major (6). Análisesgenômicas indicam que esses genes podem possuir diferentes momentos deexpressão ao longo do ciclo celular do parasita. Este estudo objetivou avaliar aexpressão de grupos de proteínas de GP63, nas diferentes fases do ciclo de vida deLeishmania sp. Para tal, anticorpos policlonais anti-GP63 produzidos frente apeptídeos específicos dessas proteínas foram obtidos, purificados e utilizados emensaios de western blotting (WB) frente a proteínas recombinantes GP63, juntamentecom ensaios de curvas de crescimento de L. braziliensis e L. infantum. A L. braziliensispossui uma grande quantidade e variabilidade de genes de GP63, que quandotestadas frente a anticorpos feitos contra peptídeos especificos da mesmademonstraram, tanto reações cruzadas contra outras GP63 como especificidade paradeterminados genes. Os ensaios utilizando curvas de crescimento de L. braziliensissugeriram a hipótese de que existe uma maior quantidade de genes sendo expressosem determinados momentos do ciclo do parasita. Ensaios de RNASeq foramrealizados e não foi possível identificar um grupo de genes GP63 sendo claramenteexpressos, apesar de existir uma maior quantidade de transcritos na fase estacionáriado parasita. Os resultados observados fornecem uma visão geral no padrão doreconhecimento de anticorpos anti-GP63 específicos e no perfil de expressão dosgenes de GP63 na fase promastigota de L. braziliensis, evidenciando a plasticidadedesse parasita, responsável pela maioria dos casos de LC no Brasil.
Abstract
Throughout its evolution the species of Leishmania developed methods of escape ofthe immune system of the hosts. One of the main escape mechanisms is mediated bythe GP63 virulence protein, which has a significant difference in the number of genesencoding it in different Leishmania species. Among the major pathogenic species, L.braziliensis has the highest number of coding genes (39) when compared to L.infantum (7) and L. major (6). Genomic analyzes indicate that these genes may havedifferent expression moments throughout the cell cycle of the parasite. This studyaimed to evaluate the expression of groups of GP63 proteins in the different phases ofthe life cycle of Leishmania sp. To that end, anti-GP63 polyclonal antibodies producedagainst specific peptides of these proteins were obtained, purified and used in westernblotting (WB) assays against recombinant GP63 proteins, together with growth curveassays of L. braziliensis and L. infantum. L. braziliensis has a large amount andvariability of GP63 genes, which when tested against antibodies against specificpeptides of the same, demonstrated both cross-reactions against other GP63 andspecificity for certain genes. The assays using L. braziliensis growth curves suggestedthe hypothesis that there is a greater amount of genes being expressed at certain timesof the parasite cycle. RNASeq assays were performed and it was not possible toidentify a group of GP63 genes being clearly expressed, although there is a greateramount of transcripts in the stationary phase of the parasite. The observed resultsprovide an overview of the pattern of recognition of specific anti-GP63 antibodies andthe expression profile of GP63 genes in the promastigote phase of L. braziliensis,evidencing the plasticity of this parasite, responsible for the majority of cases of CL inBrazil.
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