Estudo da ativação do inflamassoma em macrófagos humanos infectados por cepas de Mycobacterium tuberculosis circulantes no Brasil: evolução da virulência da cepa RDrio durante 20 anos de circulação

Abstract

Atualmente, a tuberculose é um dos principais problemas de saúde pública no mundo, afetando aproximadamente 10 milhões de pessoas anualmente. No Brasil, a linhagem RDRio de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) é a mais predominante entre os casos de tuberculose e tem sido associada ao desenvolvimento de doença grave, manifestada através da formação de cavitações pulmonares, além de fácil disseminação pela alta carga bacilar em indivíduos com a forma ativa da doença. Apesar da gravidade da doença causada por RDRio, não há estudos demonstrando como ocorre a interação de cepas dessa linhagem com as células do sistema imune. Uma importante via de ativação da inflamação na infecção por Mtb é o inflamassoma, que atua na eliminação da bactéria, e na indução de mecanismos de morte celular em células infectadas. Neste trabalho investigamos como isolados clínicos de RDRio de circulação antiga e recente promovem a modulação da resposta inflamatória de macrófagos humanos de linhagem THP-1, através da ativação de inflamassomas. Células THP-1 foram infectadas com as cepas RDRio e H37Rv durante 6, 24 e 48h, e após cada tempo foram avaliados a carga bacilar; expressão de genes envolvidos na formação do inflamassoma; liberação de citocinas IL-1β e IL-18; e morte celular Observamos que a RDRio de circulação recente (RDRio-Rec) apresentou maior capacidade de infecção do que a RDRio de circulação antiga (RDRio-Ant) (p<0,05). Entretanto, a RDRio-Ant induziu maior expressão os genes IL-1β e AIM2 em 48h de infecção em relação a RDRio-Rec (p<0,05 e p<0,05) e H37Rv (p<0,001 e p<0,001). Em 48h de infecção as duas RDRio levaram a um aumento na morte das células THP-1 infectadas em relação a H37Rv (p<0,001). Também houve alta liberação de IL-1β nossobrenadantes celulares em 4 e 48h de infecção com a RDRio-Ant (p<0,001 e p< 0,001) e RDRio-Rec (p<0,05 e p< 0,001). Concluímos que RDRio ativa inflamassomas, resultando em uma resposta inflamatória exacerbada em células THP-1, com consequente morte celular e disseminação bacteriana para o meio extracelular. Além disso, podemos associar as diferenças observadas nas respostas induzidas por cada cepa de RDRio a pressões evolutivas sofridas por esta cepa ao longo de 20 anos de circulação no Brasil, que influenciaram para que a RDRio se tornasse mais virulenta