Desenvolvimento e avaliação imunológica de uma vacina de DNA contra o vírus Chikungunya

Abstract

A febre Chikungunya é uma infecção debilitante que afeta alguns indivíduos por vários anos. O agente causador da doença é o vírus Chikungunya (CHIKV), de grande relevância médica, transmitido aos seres humanos por espécies de mosquitos Aedes. Estudos demonstraram a importância da proteção mediada por anticorpos neutralizantes que se ligam a epítopos conservados no domínio B, da glicoproteína E2 viral, inibindo a entrada ou a saída do vírus na célula. Neste projeto foi analisada a estrutura tridimensional da proteína E2 do vírus CHIKV, através de predição de epítopos (in silico), e foram identificadas duas regiões de interesse na porção do domínio B da Proteína E2 do CHIKV (DBE2-CHIKV). O DNA que codifica esta região foi comercialmente otimizado e subclonado em vetores de expressão para camundongos e humanos, visando a imunização de camundongos (para avaliação da resposta imunológica e ensaios de desafio letal). Em ambas as construções plasmidiais o antígeno DBE2 foi fusionado a região C-terminal de LAMP-1 (Lysosomal Associated Membrane Protein - 1), porção proteica que ativa a via MHC II de apresentação antigênica (favorecendo a formação de células B de memória). Camundongos foram imunizados com as formulações de DNA e os soros obtidos utilizados para avaliar a resposta imunológica, através da avaliação de resposta humoral, neutralizante e de eficiência vacinal por desafio letal. Os resultados indicam uma produção de anticorpos específicos em camundongos nocautes para a via de Interferon do tipo I, imunizados com três doses das construções vacinais, e um percentual de 82% de neutralização viral em ensaios de placa. Entretanto, a proteção não foi considerada efetiva frente à infecção com o vírus selvagem no ensaio de desafio letal. Os animais utilizados neste trabalho mostraram-se essenciais para avaliação do produto vacinal in vitro e da doença in vivo, porém não foram considerados como modelo ideal para avaliar a eficiência de um novo produto vacinal, frente a desafio letal, devido às suas limitações imunológicas.