Prospecção e caracterização de anticorpos contra Fasciola hepatica com potencial desenvolvimento para imunodiagnóstico

Abstract

A fasciolose é uma doença parasitária zoonótica de importância global. Doença negligenciada que ganhou atenção mundial nas últimas décadas, principalmente devido ao aumento da detecção de casos em humanos em diversos locais do mundo e por perdas econômicas na pecuária, alcançando bilhões por ano. No Brasil, a doença é endêmica em algumas regiões, como no Sul e Sudeste do país. Entretanto, como em outros países, ainda há uma lacuna em relação a verdadeira prevalência da Fasciola em animais, e principalmente em humanos. Havendo a necessidade de desenvolvimento e utilização de métodos de diagnósticos que sejam de fácil execução e possuam melhor custo-efetividade. Este estudo pretende produzir e caracterizar anticorpos monoclonais(mAbs) e policlonais(pAbs) com potencial para padronização de ensaios imunoenzimáticos de detecção de antígenos de F. hepatica. Para atingir tal objetivo, grupos de camundongos BALB/c foram imunizados com peptídeo predito in silico da proteína Catepsina L1 de Fasciola hepatica (PEPCL1Fh), Antígenos excretorsecretor de F. hepatica (AESFh) e Extrato total de F. hepatica (ETFh) para produção de mAbs. Os linfócitos foram fusionados com células de mieloma da linhagem Ag8XP3653 e os hibridomas obtidos, triados por ELISA indireto Os hibridomas positivos na triagem passaram por clonagem por citometria de fluxo (Single Cell Sorting), sendo selecionados por marcação os que produziram mAbs anti-PEPCL1Fh e os outros por morfologia e granulosidade, para obtenção dos mAbs. Do processo de fusão realizado, foram obtidos 44 hibridomas anti-ETFh, quatro anti-PEPCL1Fh e dois anti-AESFh. Para produção de pAbs, dois coelhos Nova Zelândia Brando foram inoculados com AESFh. Três anticorpos mAbs anti-ETFh (P1D5, P7C7 e P9B3), selecionados de processos de fusão distintas, e os anticorpos pAbs (C2) passaram por precipitação com sulfato de amônio, sendo utilizados na padronização do ensaio imunoenzimático (ELISA sanduíche). Apresentaram melhores resultados as combinações entre mAbs P1D5 ou P9B3 como anticorpo de captura e pAb C2 como anticorpo de detecção. O ensaio padronizado possui potencial para utilização na detecção de coproantígenos ou antígenos no soro. No entanto, os anticorpos produzidos neste estudo ainda precisam ser testados em experimentos subsequentes para confirmação da especificidade e sensibilidade em relação as amostras clínicas e caracterizados para que seja possível analisar as proteínas reconhecidos por todos os mAbs produzidos