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RAPID MOLECULAR DIAGNOSIS OF SPOROTRICHOSIS DIRECTLY FROM BIOLOGICAL SAMPLES FROM A REFERENCE CENTER IN BRAZIL
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Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Hospital das Clínicas. Serviço de Referência em Dermatologia. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Programa de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Plataforma de Pesquisa Clínica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Biociências. Departamento de Micologia. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Hospital das Clínicas. Serviço de Referência em Dermatologia. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Biociências. Departamento de Micologia. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Taxonomia, Bioquímica e Bioprospecção de Fungos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Hospital das Clínicas. Serviço de Referência em Dermatologia. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Programa de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Plataforma de Pesquisa Clínica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Biociências. Departamento de Micologia. Recife, PE, Brasil.
Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Médicas. Departamento de Medicina Tropical. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório Multiusuário de Pesquisa e Diagnóstico em Doenças Tropicais. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Hospital das Clínicas. Serviço de Referência em Dermatologia. Recife, PE, Brasil / Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Biociências. Departamento de Micologia. Recife, PE, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Taxonomia, Bioquímica e Bioprospecção de Fungos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract
The gold standard diagnosis of sporotrichosis is the isolation of Sporothrix sp. in culture media, but this is a time-consuming test that is susceptible to contamination and can be affected by the fungal load. Molecular methods such as nested PCR are gaining more ground in the management of several infections as they are tools for the rapid and accurate identification of microorganisms from pure cultures or directly from biological samples. This study aimed to apply a nested PCR molecular protocol for the rapid detection of Sporothrix spp. directly from clinical samples. Thirteen samples—six from skin biopsies, five from skin exudates, and two from conjunctival secretions—were obtained from patients diagnosed with sporotrichosis due to S. brasiliensis. Calmodulin gene sequencing identified all the isolates as S. brasiliensis. Nested PCR was able to detect all the Sporothrix sensu lato directly from clinical samples as well as the CBS 120339 reference strain. The nested PCR protocol stands out as a diagnostic alternative, as it allows the identification of Sporothrix spp. directly from clinical samples without the need for fungal isolation.
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