Avaliação in vitro do efeito antiparasitário e imunomodulador da lidocaína utilizando espécie causadora de leishmaniose tegumentar

Abstract

A Leishmaniose tegumentar (LT) é uma doença provocada por protozoários do gênero Leishmania, que pode se manifestar por lesões graves na pele e/ou na mucosa oronasal. Durante seu tratamento, graves sinais de toxicidade e falhas terapêuticas podem ocorrer. Devido a esses problemas, o desenvolvimento de novas terapias tem sido encorajado. Estudos com diferentes anestésicos locais mostraram que tais drogas inibiram ou retardaram o desenvolvimento de lesões cutâneas em hamsters. Contudo, os mecanismos responsáveis pela melhora clínica dos animais não foram elucidados. Portanto, o estudo proposto objetivou investigar se a lidocaína exerce atividade antiparasitária direta e/ou modula funções dos macrófagos infectados, acarretando redução do parasitismo intracelular. Para alcançar o objetivo proposto, inicialmente, foi analisado o efeito antiproliferativo e antiparasitário da lidocaína. Para isso, promastigotas e amastigotas axênicas de L. (L.) amazonensis foram incubadas com concentrações crescentes de lidocaína (0-5mg/mL) por 24h, 48h e 72h e, em seguida, realizado o ensaio de exclusão do azul de Tripan. Posteriormente, foi avaliado o efeito citotóxico da lidocaína. Para isso, macrófagos humanos também foram incubados com concentrações crescentes de lidocaína (0-5 mg/mL) por 24h e 72h e a citotoxicidade foi estimada pelo método do MTT. E, finalmente, foi avaliado o efeito antiparasitário e imunomodulador da lidocaína em macrófagos humanos. Para isso, macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis foram incubados com 0,625 mg/mL de lidocaína por 24h e 72h. Em seguida, os sobrenadantes de cultura foram coletados para a quantificação dos níveis de óxido nítrico e de citocinas, pelo método de Griess e ensaio multiplex para detecção de citocinas, respectivamente. Posteriormente, os macrófagos infectados foram corados para avaliação do índice de infecção por microscopia óptica. Além disso, tais células também foram incubadas com meio Schneider para a determinação da viabilidade dos parasitos intracelulares por microscopia óptica. Observamos que a lidocaína diminuiu de modo dose-dependente a proliferação e a viabilidade de formas axênicas de L. (L.) amazonensis. Além disso, o aumento do tempo de exposição a lidocaína acarretou aumento da suscetibilidade dos parasitos ao efeito antiproliferativo e tóxico da lidocaína. Também verificamos que a lidocaína não foi tóxica para os macrófagos humanos quando a concentração foi igual ou inferior a 0,625 mg/mL, porém determinou toxicidade quando a concentração foi igual ou superior a 1,25 mg/mL. Nossos resultados também mostraram que o tratamento com 0,625 mg/mL de lidocaína diminuiu a carga parasitária dos macrófagos infectados, e paralelamente, aumentou sua produção de óxido nítrico e reduziu a de TNF-α, IL-6, IL-1β, IL-8. Além disso, a lidocaína também reduziu a viabilidade das amastigotas intracelulares. Portanto, de modo coletivo, os nossos dados indicam que a lidocaína é dotada de potente ação anti-Leishmania. Além disso, também é capaz de modular funções dos macrófagos envolvidas na imunidade e imunopatogenia da leishmaniose tegumentar. É importante que pesquisas futuras explorem mais a fundo esses achados, investigando não apenas a aplicabilidade clínica da lidocaína no tratamento da LT, mas também elucidando os mecanismos moleculares e celulares pelos quais afeta os parasitos intracelulares.