Evaluation of bioluminescence method for sterility test of buffer solution, bulk and finished product of a viral vaccine

Abstract

O teste de esterilidade é uma das medidas destinadas a garantir a qualidade dos imunobiológicos, que devem ser estéreis, sendo adequados para revelar a presença de microorganismos. O teste de esterilidade deve ser realizado em uma amostra representativa com um tempo de incubação de 14 dias. Embora o ensaio seja eficiente, simples e de relativo baixo custo, apresenta algumas limitações como: resultados tardios, baixa seletividade do meio de cultura e variabilidade na resposta biológica dos microrganismos. Por outro lado, o método da bioluminescência é uma alternativa capaz de processar simultaneamente um grande número de amostras e obter resultados em menor tempo. O método consiste na extração de adenosina trifosfato (ATP) de células microbianas, utilizando o sistema enzimático luciferina/luciferase e medindo a luz gerada por um luminómetro. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da solução Phosphate Buffered Saline (PBS), do produto a granel e do produto acabado de uma vacina viral na análise realizada pelo sistema de bioluminescência (Celsis Accel® System - Charles River). Para o controle de cada produto, as amostras foram filtradas, de acordo com o método compendial, e incubadas durante 24 h a 32,5 °C com o meio fluido de tioglicolato e caldo de caseína-soja. Um frasco com o mesmo lote dos meios de cultura utilizados foi incubado nas mesmas condições e utilizado como calibrador. Para preparar os microrganismos, foi efetuada uma diluição de menos de 100 células de Staphylococcus aureus ATCC 6538, Clostridium sporogenes ATCC 11437 e Bacillus subtilis ATCC 6633 e incubada durante 24 horas a 32,5°C. Após o período de incubação, as amostras foram adicionadas em duplicata em cuvetes para análise no Celsis Accel® System, seguindo a ordem para cada meio de cultura: 1) 900 μl de Calibrador; 2) 900 μl de amostra controle; 3) Controle de ATP (900 μl calibrador + 100 μl ATP); 4) Amostra produto ATP (900 μl amostra controle + 100 μl ATP); 5) Amostra de produto microbiológico (900 μl de controle da amostra + 100 μl de Staphylococcus aureus, Clostridium sporogenes ou Bacillus subtilis) e 6) Controle microbiológico (900 μl de calibrador + 100 μl de Staphylococcus aureus, Clostridium sporogenes ou Bacillus subtilis). O sistema Celsis Accel® apresentou resultados adequados e viabilidade na análise do produto PBS. No entanto, para o produto a granel e o produto acabado, o sistema identificou a presença de ATP na amostra de controlo. Em conclusão, a utilização do sistema de bioluminescência na análise de vacinas virais, que são produzidas utilizando células, requer uma avaliação mais exacta e testes adicionais, incluindo a necessidade de avaliar a utilização de um maior volume de água de lavagem para remover resíduos de ATP da amostra que possam ficar retidos na membrana.