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CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA DA MICONIA ALBICANS (SW.) TRIANA E ATIVIDADE INIBITÓRIA IN VITRO DE SEUS EXTRATOS SOBRE O VÍRUS CHIKUNGUNYA
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Abstract in Portuguese
A febre Chikungunya é uma arbovirose transmitida pelo vírus chikungunya, com sintomas de dores intensas nas articulações e dores de cabeça. Sem terapias antivirais, a população tem usado a espécie Miconia albicans (MA, “canela-de-velho”) como tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antiviral dos extratos de folhas e de galhos dessa espécie, em EtOH 70%, ou EtOH 95% alcalinizado com hidróxido de sódio. O clean-up dos extratos foi realizado por partição em MeOH-água/hexano e também com amberlite XAD-4, cuja otimização foi monitorada por CCD e CLAE-DAD para a presença de polifenóis. A limpeza em resina e condições analíticas (CCD e HPLC) foram aplicadas a nove amostras comerciais de MA. Os teores de polifenóis totais (TP) e flavonóides totais (TF) foram determinados por Folin-Ciocaulteu e análise colorimétrica na presença de AlCl3, respectivamente. Na espécie coletada foram analisados qualitativamente os ácidos triterpênicos por CG-EM após trimetilsililação dos extratos alcalinos. O extrato da folha (2,8-7,1% de rendimento) continha principalmente flavonóides, incluindo rutina, quercitrina e isoquercitrina, conforme indicado por HPLC-DAD e injeções de compostos padrão. A quantificação por HPLC-DAD com curvas de calibração independentes resultou em 0,55 mg/g, 1,59 mg/g e 1,13 mg/g de extrato para os três flavonoides glicosilados, respectivamente. Os galhos apresentaram apenas baixa concentração de isoquercitrina (0,08 mg/g). O teor de PT nas folhas resultaram entre 50-200 mg querc-equiv/g extrato, em metanol, e 100-400 mg querc-equiv/g amostra, em metanol/água 1:1. FT resultou entre 8-25 mg querc-equiv/g de extrato. CCD revelou que os ácidos ursólico (AU), oleanólico (AO) e betulínico (AB) concentraram seletivamente no extrato alcalinizado de MA. A atividade antiviral foi avaliada para os extratos brutos de folhas e galhos, o extrato de folhas após limpeza em XAD-4 (EFX), e o extrato alcalinizado das folhas (EFOH). Os experimentos foram realizados em doses tolerantes para células Vero (viabilidade acima de 80%), todas abaixo de 50 μg/ml. O extrato EFOH, avaliado via marcação de antígenos do Chikungunya por citometria de fluxo, foi efetivo em reduzir em 50% a infecção viral.
Abstract
Chikungunya fever is an arbovirus transmitted by the chikungunya virus, with symptoms of severe joint pain and headaches. Without antiviral therapies, the population has been using the species Miconia albicans (MA, “canela-de-velho”) as a treatment. The aim of this study was to evaluate the antiviral activity of extracts from leaves and branches of this species, collected in situ, in EtOH 70%, and EtOH 95% alkalized with sodium hydroxide. The clean-up of extracts was performed by partitioning in MeOH-water/hexane and also with amberlite XAD-4, whose optimization was monitored by CCD and HPLC-DAD for the presence of polyphenols. The clean-up in resin and analytical conditions (CCD and HPLC) were applied to nine commercial samples of MA. The content of total polyphenols (TP) and total flavonoids (TF) were determined by Folin-Ciocaulteu and colorimetric analysis in the presence of AlCl3, respectively. In the collected species, triterpenic acids were qualitatively analyzed by GC-MS after trimethylsilylation of the alkaline extracts. The leaf extract (2.8-7.1% yield) contained mainly flavonoids, including rutin, quercitrin and isoquercitrin, as indicated by HPLC-DAD and injections of standard compounds. Quantification by HPLC-DAD with independent calibration curves resulted in 0.55 mg/g, 1.59 mg/g and 1.13 mg/g of extract for the three glycosylated flavonoids, respectively. The branches showed only a low concentration of isoquercitrin (0.08 mg/g). The PT content in the leaves resulted between 50-200 mg quercetin-equiv/g extract, in methanol, and 100-400 mg quercetin-equiv/g sample, in methanol/water 1:1. FT resulted between 8-25 mg quercetin-equiv/g extract. FT yielded between 8-25 mg querc-equiv/g extract. CCD revealed that ursolic acid (AU), oleanolic (AO) and betulinic (AB) were selectively concentrated in the alkalinized MA extract. The antiviral activity was assessed for the crude extracts of leaves and branches, extract of leaves after clean-up in XAD-4 (EFX), and the 95% alkalinized extract of leaves (EFOH). The experiments were carreied out at tolerant doses for Vero cells (viability above 80%), all below 50 μg/ml. The EFOH extract, evaluated by marking Chikungunya antigens by flow cytometry, was effective in reducing by 50% the viral infection.
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