Perfil bioquímico, hematológico, molecular, histopatológico e ultraestrutural da infeccção experimental de camundongos Balb/c com o vírus Zika

Abstract

Este estudo objetiva desenvolver abordagens teórica e prática sobre a utilização de modelo animal para estudo com o vírus Zika (ZIKV). A teórica envolve uma revisão sistemática desses modelos com ênfase na histopatologia e biologia molecular. A prática trata de uma infecção experimental objetivando avaliar os aspectos clínicos, bioquímicos, hematológicos, perfil de viremia, carga viral de diferentes órgãos, além de análises histopatológicas e ultraestruturais do testículo de camundongos BALB/c infectados. O protocolo da revisão sistemática foi registrado na plataforma PROSPERO (CRD42021273929) e as buscas foram realizadas nas plataformas PubMed, Embase, Google Acadêmico, Scielo, LILACS, MedRXiv, Scielo preprints e Research Square. A partir dos materiais encontrados foram aplicados os critérios de inclusão e exclusão na análise de título, resumo e texto completo (análise em modo duplo-cego). A partir dos artigos incluídos foi realizada extração de dados e análise de risco de viés com a ferramenta SYRCLE. Na parte prática do projeto, camundongos BALB/c foram inoculados com doses de 7,12 x 106 cópias genômicas de ZIKV/μL pela veia caudal. Em três, sete e catorze dias pós infecção (DPI), grupos de animais eram anestesiados para coleta de sangue por punção cardíaca, eutanásia e coleta do cérebro, cerebelo, pulmões, coração, fígado, baço, rins, músculo esquelético e testículos. A partir do sangue foram realizadas análises bioquímicas, hematológicas e viremia. Os órgãos foram macerados e os sobrenadantes foram utilizados objetivando a quantificação do RNA tecidual. Por fim, foi realizada a análise histopatológica e ultraestrutural dos testículos. Como resultados, na revisão sistemática foram encontrados inicialmente 735 artigos, dos quais 27 foram incluídos após todas as etapas de avaliação. Camundongos e primatas não-humanos foram as espécies mais utilizadas. A cepa viral mais frequente foi a PRVABC59 (Porto Rico, 2015) e inoculado majoritariamente por via subcutânea. Entre os sinais clínicos mais reportados estão a conjuntivite/secreção ocular, paralisia dos membros inferiores, letargia e postura arqueada. As análises histopatológicas foram realizadas principalmente em cérebro, sendo a presença de infiltrado inflamatório e degeneração celular as alterações mais comuns. Já em nossos estudos experimentais observamos que os animais infectados tiveram poucos sinais clínicos, tendo ganho mais lento de peso, discreta leucopenia, alteração dos parâmetros associados à hemoglobina, aumento das transaminases hepáticas e da ureia em 3DPI, além do aumento da fração de globulinas em 14DPI. A detecção do RNA viral ocorreu em duas amostras do pulmão (3DPI), uma do coração (3DPI), uma do testículo (7DPI) e doze do baço (cinco em 3DPI, três em 7DPI e quatro em 14DPI). A análise histopatológica do testículo revelou intensa desorganização da estrutura dos túbulos seminíferos, infiltrado inflamatório, necrose, hemorragia, acúmulo de líquido, congestão de vasos sanguíneos e redução da contagem espermática. A análise ultraestrutural mostrou alterações nucleares em células tubulares, ativação de células intersticiais e alterações morfológicas em espermatozoides, além de fragmentação e diminuição da eletrodensidade de seu material genético. Conclui-se que os camundongos BALB/c são um bom modelo para estudar os danos subclínicos que a infecção pelo ZIKV pode causar. No entanto maiores estudos são necessários para conhecer os efeitos da infecção em outros órgãos.