Estudo ultraestrutural e morfométrico de componentes do citoesqueleto e do transporte intraflagelar no protista Trichomonas vaginalis

Abstract

Trichomonas vaginalis (Tv), agente causador da tricomoníase humana, é um protista flagelado que apresenta estruturas incomuns, tais como membrana ondulante (MO), a costa (Co) e os filamentos parabasais (FPs). Os flagelos são organelas que desempenham um importante papel na interação parasito-hospedeiro e, portanto, compreender sua morfogênese é fundamental. Nesse contexto, em muitos eucariotos, a morfogênese está relacionada com o transporte intraflagelar (TIF) e apesar da identificação de proteínas homólogas do TIF no genoma de Tv, não há relatos dessa estrutura nas tricomonas. A MO, Co e FPs são estruturas essenciais para locomoção, estrutura/organização, comunicação celular, suporte de organelas e interação parasito-hospedeiro. Entretanto, apesar desses conhecimentos a ultraestrutura destas em Tv ainda não está totalmente caracterizada. Assim, neste trabalho, objetivamos aprofundar o conhecimento das estruturas do citoesqueleto de Tv, investigando a presença do TIF e obtendo novas informações ultraestruturais sobre a MO, Co e os FPs de Tv. Para o estudo do TIF Tv foi processada para microscopia eletrônica de transmissão. Neste trabalho demonstramos pela primeira vez a presença de trilhos do TIF, uma estrutura eletrondensa localizada entre a membrana flagelar e o axonema, em Tv. Porém, diferentemente do que foi descrito em outros eucariotos, no qual os trilhos são vistos em ambos os lados do axonema, em Tv os trilhos foram identificados em apenas um lado. Utilizando diferentes atividades experimentais realizamos novas descobertas sobre estrutura de superfície (e.g. MO) e do citoesqueleto (e.g. Co e FPs). Esses componentes são essenciais para diversas funções, porém em Tv são pouco estudados e portanto, concentramos esforços para caracterizá-los. Para analisar essas estruturas realizamos a permeabilização ou extração da membrana plasmática com detergentes não-iônicos. Notamos que a MO de Tv é formada por uma estrutura semelhante à treliça, corroborando o que já se tem descrito em outras espécies de tricomonadíneos. Além disso, observamos, sem utilizar reconstrução 3D, a presença de todos os FPs e a região de bifurcação do FP1. Identificamos também a presença de três regiões que compõe a Co de Tv. Utilizando a transformada rápida de Fourier analisamos a quantidade e distância entre as sub-bandas dos filamentos parabasais e as regiões da costa a fim de analisar o padrão de bandeamento. Diante disso, neste estudo descrevemos pela primeira vez a presença do TIF em tricomonas. Além disso, desenvolvemos protocolos que possibilitaram analisar detalhes morfológicos nunca vistos na literatura sobre as estruturas de superfície e do citoesqueleto de Tv .