Avaliação de um sistema baseado em LAMP (Amplificação isotérmica em Alça) na detecção do alvo molecular IS6110 para o diagnóstico da tuberculose extrapulmonar

Abstract

A tuberculose (TB) é uma doença infecciosa que possui como agente etiológico o Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Seu diagnóstico é feito através da análise das características clínicas-epidemiológicas, junto a exames de imagem, laboratoriais, moleculares e imunológicos. Entretanto, para a forma extrapulmonar (TBE), o diagnóstico apresenta dificuldades, devido à sintomatologia inespecífica e à baixa sensibilidade dos métodos convencionais (baciloscopia e cultura). A Amplificação Isotérmica em Alça (LAMP) é uma técnica rápida e de baixo custo, capaz de amplificar, sob condições isotérmicas, poucas cópias de um DNA alvo em aproximadamente 109 moléculas. O método tem sido aplicado com sucesso na detecção de vários micro-organismos, apresentando alta eficácia. O presente trabalho busca avaliar um sistema de LAMP na detecção do alvo IS6110 para o diagnóstico da TBE. As amostras biológicas utilizadas nesse estudo são de pacientes provenientes de hospitais da rede SUS (n = 72), divididos em dois grupos: Grupo 1 – com diagnóstico confirmado de TBE (n = 41); Grupo 2 – Pacientes sem TB (n = 31). As amostras passaram processos de descontaminação, extração de DNA e, posteriormente, submetidas à técnica de LAMP. O limite de detecção foi avaliado através de quatro diferentes curvas de diluição (1:10), utilizando DNA genômico de cepa de referência do Mtb (H37Rv). O ensaio de LAMP foi testado em 122 amostras biológicas, sendo 61 do Grupo 1 e 61 do Grupo 2. Os resultados obtidos indicaram que o limite de detecção do LAMP foi de 10fg/ μL, equivalente a 2 bacilos/μL. Em relação à sensibilidade e especificidade da técnica, foram obtidos valores de 90,16% e 63,93%, respectivamente. Devido a sua elevada sensibilidade, associado ao bom limite de detecção apresentado, este teste possui considerável valor diagnóstico, sendo capaz de auxiliar na rapidez e precisão do diagnóstico final, gerando um melhor prognóstico para os pacientes com suspeita de TBE.