Avaliação da função e do potencial imunoprotetor da proteína Sm16 de Schistosoma mansoni Sambon, 1907 (Plathyhelmintes:Trematoda).

Abstract

A esquistossomose é um grave problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Apesar da quimioterapia usada para tratar a esquistossomose ser efetiva, a doença continua afetando milhões de pessoas, especialmente as mais pobres. As constantes reinfecções, saneamento público inadequado e as limitações das estratégias utilizadas para controle da doença contribuem para o avanço da esquistossomose. Uma vacina poderia exercer um importante papel no controle e/ou na interrupção da transmissão da doença. Nesse sentido, vários antígenos têm sido testados como possíveis candidatos vacinais contra a infecção por Schistosoma. No entanto, uma vacina ainda não está disponível para uso em programas de imunização. A falta de uma vacina deve-se em grande parte à habilidade do parasito de evadir-se do sistema imune do hospedeiro. Dessa forma, nós hipotetizamos que o bloqueio das funções de uma proteína imunomodulatória de Schistosoma mansoni tornaria o parasito mais susceptível à ação do sistema imune do hospedeiro, levando-o à morte. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a função e o potencial imunoprotetor da Sm16 em modelo murino. Nesse trabalho, nós utilizamos ferramentas da bioinformática para caracterizarmos a proteína Sm16 quanto à presença de peptídeo sinal, de epítopos de células B e T, de sítios de glicosilação, de domínios transmembrana e similaridade com proteínas humanas. Adicionalmente, nós produzimos a Sm16 na forma recombinante (Sm16r) e obtivemos anticorpos policlonais para avaliar a expressão desta proteína nos estágios de vida do parasito em seu hospedeiro vertebrado e a presença da proteína na interface parasito-hospedeiro. Avaliamos ainda a resposta imune desencadeada pela vacinação com a Sm16r em duas formulações vacinais e a capacidade destas respostas levarem a morte do parasito. Além disso, avaliamos o papel da Sm16 na sobrevivência do parasito durante o curso da infecção, utilizando a tecnologia de RNA de interferência. Nossos resultados demonstraram que a proteína estudada possui peptídeo sinal, um sítio de glicosilação, Epítopos de células B e T, não possui similaridade com proteínas de humanos e caracteriza-se como sendo secretada. Observamos que Sm16 é expressa em cercárias e esquistossômulos de 3 e 7 dias e está localizada na superfície externa do parasito. Apesar da resposta imune humoral e celular desencadeada pela imunização com a Sm16r em associação com os adjuvantes Freund ou Alum, os camundongos imunizados não apresentaram redução na carga parasitária ou no número de ovos retidos no fígado e intestino. A redução da expressão de Sm16 em esquistossômulos resultou na diminuição da área dos parasitos 2 e 4 dias após o silenciamento. Porém, não observamos efeito da diminuição da expressão genica na sobrevivência do parasito ou no número de ovos. O perfil de resposta imune celular também foi avaliado nos animais infectados com esquistossômulos silenciados para o gene Sm16. Nossos resultados demonstraram que houve uma diminuição no percentual de células B produtoras de IL-10 e macrófagos reguladores, 5 e 10 dias após a infecção. Além disso, observamos um maior percentual de células B no 3° dia e de células T ativadas no 3° e 10° dias após a infecção. Apesar da diminuição da expressão de Sm16 ter ativado uma resposta imune adaptativa, esta ativação não se correlaciona com diminuição da carga parasitária. Nossos resultados demonstram que a Sm16 não é essencial para a sobrevivência do parasito no hospedeiro e a forma recombinante da Sm16 utilizada neste trabalho não representa um bom candidato vacinal contra esquistossomose.