Edição gênica em células tronco hematopoéticas para síndrome de Wiskott-Aldrich baseada no sistema CRISPR

Abstract

No campo da terapia gênica, as células-tronco hematopoiéticas (CTH) têm se tornado atrativas devido à sua capacidade de promover a hematopoiese por um longo período, oferecendo uma opção de tratamento para distúrbios do sistema hematopoiético, como os erros inatos da imunidade (EII). Vetores virais têm sido utilizados como estratégia de entrega de material genético para correção do gene causador da síndrome de Wiskott-Aldrich no entanto, a segurança desse método é questionável. Nesse contexto, o presente estudo propõe o sistema CRISPR/Cas9 como uma estratégia inovadora de terapia gênica para inserção e correção genética sítio-dirigida do gene WAS em CTH CD34+ purificadas de sangue de cordão umbilical humano. O RNAg desenhado apresentou uma eficácia de 93,3% em clivar o DNA no alvo. Apesar do pequeno número amostral, os resultados mostram edição gência utilizando doador linearizado para correção do gene WAS em CTH CD34+ expandidas com coquetel de citocinas e moléculas moduladoras de ciclagem celular tratadas com drogas estimuladoras de correção por recombinação homóloga. Embora a eficiência de correção gênica tenha se mostrado baixa < 1 %, os resultados confirmam a integração e estabilidade do DNA doador no alvo do genoma das células CD34+ . Assim, concluímos que o sistema CRISPR/cas9 é uma ferramenta promissora para edição genética sítio-dirigida no gene WAS, permitindo a criação de uma plataforma de estudos pré-clínicos onde estratégias de terapia gênica possam ser testadas em sua eficiência, segurança e estabilidade, imprescindíveis para o futuro no Brasil dessas terapias como estratégia curativa para doenças genéticas.