Perfil de expressão de componentes da via sinalizadora de RAP1 em culturas organotípicas de queratinócitos humanos que expressam as oncoproteínas E6 e E7 de HPV16

Abstract

A infecção por tipos de HPV de alto risco oncogênico é o principal fator de risco para o desenvolvimento do câncer cervical. Nosso grupo de pesquisa identificou a proteína celular RAP1 como um biomarcador do câncer cervical, com potencial utilização no auxílio ao diagnóstico. RAP1, uma pequena GTPase pertencente à superfamília RAS, possui duas isoformas, RAP1A e RAP1B. RAP1 funciona como um interruptor molecular, regulando a sinalização de processos celulares como a proliferação, diferenciação, morfogênese e apoptose. Este trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de expressão de vários componentes da via de sinalização da proteína RAP1 em culturas organotípicas de queratinócitos humanos que expressam as oncoproteínas E6 e/ou E7 de HPV16. A cultura organotípica de queratinócitos humanos foi escolhida como nosso modelo experimental, por ser um sistema que permite gerar um epitélio escamoso estratificado com arquitetura muito semelhante àquela observada em tecidos provenientes de espécimes biológicos. Assim, foram obtidas três réplicas biológicas de quatro tipos de culturas organotípicas de queratinócitos humanos transduzidas com o vetor retroviral pLXSN contendo os genes de E6 e/ou E7 de HPV16 e com o vetor retroviral vazio (cultura controle). A análise da expressão gênica e proteica dos componentes da via RAP1, a saber: RAP1A, RAP1B, seus reguladores C3G, EPAC, E6TP1 e RAP1GAP, assim como os seus efetores ERK, BRAF e integrinas αv, β1, β3, β4 e β6, foi feita por PCR em tempo real e imuno-histoquímica, respectivamente. Os resultados demonstraram que não ocorreram alterações significativas consideráveis, nos níveis de expressão da maioria dos componentes da via RAP1 nas culturas organotípicas E6, E7 e E6E7, quando comparadas à cultura controle. Todavia, o aumento significativo dos níveis de mRNA e da intensidade da imunomarcação para RAP1GAP (inibidora de RAP1) foi observado nas culturas E6, E7 e E6E7. Adicionalmente, a diminuição significativa dos níveis de mRNA da integrina β6 (ITGβ6) foi verificada nas culturas contendo E6, E7 e E6E7. Neste contexto, nossos resultados indicam que a expressão de componentes da via de sinalização da proteína RAP1, especialmente, RAP1GAP e ITGβ6 estão alterados em culturas organotípicas de queratinócitos que expressam as oncoproteínas E6 e E7 de HPV16.