Desenvolvimento e avaliação de teste imunoenzimático utilizando antígeno recombinante para o diagnóstico sorológico do vírus da Hepatite E (HEV) em humanos e suínos domésticos

Abstract

O vírus da hepatite E (HEV) pode desencadear hepatite aguda e crônica, principalmente em indivíduos imunocomprometidos. A transmissão zoonótica do HEV-3 e HEV-4 para o homem ocorre principalmente devido ao consumo de alimentos derivados de porco. Portanto, a vigilância do HEV se faz necessária. Neste contexto, o presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar a performance de um novo teste imunoenzimático indireto multi-espécie com antígeno recombinante para diagnóstico sorológico do HEV em amostras de suínos e humanos. Para alcançar o objetivo traçado, foi realizada inicialmente a expressão e purificação dos antígenos recombinantes do capsídeo de suíno (swHEV CP2) e roedor (ratHEV CP). Em seguida, foi realizada a padronização e validação do ELISA indireto. Foram utilizadas 212 amostras de soro de suínos e 366 de humanos, que foram testadas em dois kits ELISA comerciais (multi-espécie e espécie específica). As amostras concordantes nos dois kits (Training Group) foram utilizadas para confecção da curva ROC. Para amostras de suínos, o ELISA utilizando swHVE CP2 demonstrou 94,34% sensibilidade e 100% de especificidade (AUC = 0,9898), sendo o cut-off estabelecido de 0,1796. A soroprevalência de acordo com o ELISA desenvolvido foi de 57,5%. Na análise do Training Group, o ELISA desenvolvido apresentou o índice kappa de 0,916, valor preditivo positivo (VPP) de 100% e valor preditivo negativo (VPN) de 89,66%. O teste demonstrou correlação positiva com o kit multi-espécie ( 0,84) e kit específico (0,89), além de 96,20% de acurácia. Em relação a amostras de humanos, o teste com o antígeno swHEV CP2 demonstrou cerca de 94% de sensibilidade e 66% de especificidade (AUC = 0,9003), o cut-off determinado foi 0,1319. Observou-se o kappa index de 51,5% utilizando o Training Group, além de 100% e 66,6% de VPP e VPN, respectivamente. A correlação do ELISA (swHEV CP2) com os kits foi positiva moderada, sendo 0,66 com o multi-espécie e 0,76 com o específico. A acurácia do teste foi 75,5%. De acordo com os resultados para humanos, visando melhoria da performance do teste em questão, foi desenhado e obtido uma construção quimérica, denominada HEVME, que contém epítopos de células B promissores. Posteriormente será feita a avaliação do HEVME e suas variantes. Neste estudo, desenvolvemos e validamos um ELISA usando o antígeno swHEV CP2 para detectar a infecção por HEV em suínos, revelando alta circulação do vírus em fazendas de Pernambuco, no Brasil. Contudo, são necessárias novas validações para aplicação multi-espécie.