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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/66377
DESENVOLVIMENTO E USO DE QPCR COMO ALTERNATIVA PARA O DIAGNÓSTICO E CONTROLE DA ESQUISTOSSOMOSE EM ÁREAS DE BAIXA ENDEMICIDADE PARA A DOENÇA
Esquistossomose -- diag
Schistosoma mansoni -- genet
DNA de protozoários
Diagnóstico Molecular
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Microscopia -- metodo
Sensibilidade e Especificidade
Estudo Comparativo
Schistosoma mansoni
DNA de protozoários
Diagnóstico Molecular
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Microscopia
metodo
Sensibilidade e Especificidade
Estudo Comparativo
Pires, Eduardo Henrique Matos | Date Issued:
2024
Advisor
Co-advisor
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract in Portuguese
A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por trematódeos do gênero Schistosoma. No Brasil, país endêmico apenas para S. mansoni, é responsável pela manifestação hepatoesplênica da doença. A prevalência nacional da infecção diminui drasticamente devido a implementação de medidas de controle, resultando na manutenção de áreas de baixa endemicidade para a parasitose. Diante do novo cenário epidemiológico enfrentado, o exame parasitológico Kato-Katz (KK), recomendado para o diagnóstico da helmintíase, apresenta baixa sensibilidade em áreas de baixa endemicidade, o que dificulta o controle da doença. Diante disso, novas alternativas de diagnóstico estão sendo estudadas para o controle da enfermidade, dentre elas, o diagnóstico molecular. Portanto, o trabalho tem como objetivo principal avaliar o desempenho de uma nova qPCR (SmITS-qPCR) para o diagnóstico da doença em um território de baixa endemicidade. Para isso, um novo ensaio de qPCR (SmITS-qPCR) foi otimizado com concentrações conhecidas de DNA genômico de S. mansoni e aplicado em amostra de fezes coletadas em área de baixa endemicidade para a doença. Além da SmITS-qPCR, os métodos parasitológicos KK e Hoffman foram realizados como método de referência composto. A SmITS-qPCR apresentou sensibilidade analítica de 1fg/μL, sendo capaz de detectar menos de uma célula do helminto. Além disso, o sistema apresentou sensibilidade de 85,11% e especificidade 59,61%, com índice Kappa de 0,218. A taxa de positividade da infecção, pelos métodos de referência composto, foi de 13,28% (47/354), enquanto para a SmITS-qPCR foi de 46,61% (165/354). Além disso, o novo sistema foi capaz de classificar a carga parasitária com base no cycle threshold (Ct), como Leve ou Moderada. A SmITS-qPCR se revela uma ferramenta sensível e barata para uso como teste de triagem em populações que vivem em áreas de baixa endemicidade para doença, se associada a métodos de extração menos dispendiosos. Além disso, o novo sistema apresenta potencial em determinar a carga parasitária com base no Ct, fator importante na avaliação clínica e epidemiológica de regiões endêmicas(AU).
Abstract
Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by trematodes of the genus Schistosoma. In Brazil, a country endemic only for S. mansoni, it is responsible for the hepatosplenic manifestation of the disease. The national prevalence of the infection has decreased dramatically due to the implementation of control measures, resulting in the maintenance of areas of low endemicity for the parasitosis. Facing this new epidemiological scenario, the Kato-Katz parasitological test, recommended for the diagnosis of helminthiasis, has low sensitivity in areas of low endemicity, which hampers the disease control. Thus, new diagnostic alternatives are being studied to control the disease, including molecular diagnosis. Therefore, the main objective of this study is to evaluate the performance of a new qPCR (SmITS-qPCR) for diagnosing the disease in a low-endemicity area. For that, a new qPCR assay (SmITS-qPCR) was optimized with known concentrations of S. mansoni genomic DNA and applied to stool samples collected in an area of low endemicity. In addition to SmITS-qPCR, the KK and Hoffman parasitological methods were performed as a composite reference method. SmITS-qPCR showed analytical sensitivity of 1fg/μL, being able to detect less than one helminth cell In addition, the system showed a sensitivity of 85.11% and specificity of 59.61%, with a Kappa index of 0.218. The positivity rate of infection, using the composite reference methods, was 13.28% (47/354), while for SmITS-qPCR it was 46.61% (165/354). In addition, the new system was able to classify the parasite load based on cycle threshold (Ct) as light or moderate. SmITS-qPCR is proving to be a sensitive tool for population screening for schistosomiasis in areas of low endemicity, if associated with less expensive extraction methods. Furthermore, the new system has the potential to determine the parasite load based on Ct, an important factor in the clinical and epidemiological evaluation of endemic regions (AU).
Keywords in Portuguese
Esquistossomose -- parasitolEsquistossomose -- diag
Schistosoma mansoni -- genet
DNA de protozoários
Diagnóstico Molecular
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Microscopia -- metodo
Sensibilidade e Especificidade
Estudo Comparativo
DeCS
EsquistossomoseSchistosoma mansoni
DNA de protozoários
Diagnóstico Molecular
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Microscopia
metodo
Sensibilidade e Especificidade
Estudo Comparativo
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