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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/66872
ANALYSIS OF YEAST EXTRACELLULAR VESICLES
Author
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde (CDTS) Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde (CDTS) Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto de Microbiologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto de Microbiologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil / Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil
Laboratório de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Biologia Estrutural e Bioimagem, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil / Laboratório de Biologia Estrutural, Instituto Nacional de Metrologia Normalização e Qualidade Industrial (INMETRO), Rio de Janeiro, Brazil
Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto de Microbiologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças de Populações Negligenciadas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde (CDTS) Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto de Microbiologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto de Microbiologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil / Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil
Laboratório de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Biologia Estrutural e Bioimagem, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil / Laboratório de Biologia Estrutural, Instituto Nacional de Metrologia Normalização e Qualidade Industrial (INMETRO), Rio de Janeiro, Brazil
Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil
Instituto de Microbiologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças de Populações Negligenciadas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
Vesículas extracelulares (EV) são importantes transportadoras de componentes biologicamente ativos em vários organismos, incluindo células fúngicas. A caracterização experimental de EVs fúngicas sugeriu que esses compartimentos membranosos provavelmente estão envolvidos na regulação de vários eventos biológicos. Em patógenos fúngicos, esses eventos incluem mecanismos de progressão e/ou controle da doença, sugerindo alvos potenciais para intervenção terapêutica ou profilaxia da doença. Neste manuscrito, descrevemos métodos que foram usados nos últimos 10 anos para a caracterização de EVs produzidas por formas de levedura de várias espécies fúngicas. As abordagens experimentais detalhadas neste capítulo incluem métodos de ultracentrifugação para fracionamento de EV, abordagens cromatográficas para análise de lipídios de EV, técnicas de microscopia para análise de compartimentos vesiculares intracelulares e extracelulares, interação de EVs com células hospedeiras e análise físico-química de EVs por espalhamento dinâmico de luz.
Abstract
Extracellular vesicles (EV) are important carriers of biologically active components in a number of organisms, including fungal cells. Experimental characterization of fungal EVs suggested that these membranous compartments are likely involved in the regulation of several biological events. In fungal pathogens, these events include mechanisms of disease progression and/or control, suggesting potential targets for therapeutic intervention or disease prophylaxis. In this manuscript we describe methods that have been used in the last 10 years for the characterization of EVs produced by yeast forms of several fungal species. Experimental approaches detailed in this chapter include ultracentrifugation methods for EV fractionation, chromatographic approaches for analysis of EV lipids, microscopy techniques for analysis of both intracellular and extracellular vesicular compartments, interaction of EVs with host cells, and physical chemical analysis of EVs by dynamic light scattering.
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