New structural insights into Golgi Reassembly and Stacking Protein (GRASP) in solution

Abstract

Entre todas as proteínas localizadas no aparelho de Golgi, uma proteína de domínio duplo PDZ (PSD95/DlgA/Zo-1) desempenha um papel importante na montagem das cisternas. Esta proteína de remontagem e empilhamento de Golgi (GRASP) tem intrigado os pesquisadores devido à sua grande variedade de funções e relevância na funcionalidade do Golgi. Relatamos aqui um estudo bioquímico e biofísico do homólogo GRASP55/65 em Cryptococcus neoformans (CnGRASP). Análise bioinformática, espectroscopias de fluorescência estática e dicroísmo circular, calorimetria, espalhamento de raios X de pequeno ângulo, ressonância magnética nuclear em solução, cromatografia de exclusão de tamanho e ensaios de proteólise foram usados ​​para desvendar características estruturais do CnGRASP de comprimento total. Detectamos a coexistência de estruturas secundárias regulares e grandes quantidades de regiões desordenadas. A estrutura geral é menos compacta do que uma proteína globular regular e a alta flexibilidade estrutural torna seu núcleo hidrofóbico mais acessível ao solvente. Nossos resultados indicam um comportamento incomum de CnGRASP em solução, assemelhando-se muito a uma classe de proteínas intrinsecamente desordenadas chamadas proteínas de glóbulos fundidos. Até onde sabemos, esta é a primeira caracterização estrutural de um GRASP de comprimento total e observação de um comportamento semelhante a um glóbulo fundido na família GRASP. As possíveis implicações disto e como isto poderia explicar as múltiplas facetas desta intrigante classe de proteínas são discutidas.