Estudo da diversidade genética da Proteína Rica em Histidina 2 (HRP2) de Plasmodium falciparum e sua influência no desempenho dos Testes Rápidos de Diagnóstico (RDT) de malária

Abstract

Os Testes Rápidos de Diagnóstico (RDTs) da malária tornaram-se fundamentais, principalmente por serem fáceis de manusear e por entregarem o resultado em questão de minutos. A maioria dos testes se baseiam na detecção da Proteína Rica em Histidina 2 (PfHRP2) de Plasmodium falciparum. Em certas condições, o teste pode apresentar reação cruzada com a Proteína Rica em Histidina 3 (PfHRP3) que apresenta composição de aminoácidos muito semelhante à PfHRP2. Parasitos sem os genes pfhrp2/3 têm sido documentados em várias regiões nos últimos anos, com prevalência estimada variando de 1% a 100%. No Brasil, um estudo anterior do nosso grupo mostrou que amostras coletadas em Roraima entre 2018-2021 apresentavam a maior taxa de deleção de pfhrp2 comparado a demais estados da região amazônica brasileira. Portanto, para melhor caracterizar os isolados de P. falciparum em Roraima, porta de entrada da malária importada no país, este estudo analisou 365 amostras (positivas para P. falciparum na microscopia) coletadas entre 2016 e 2018. Enquanto 6% apresentaram resultado falso-negativo nos RDTs, apenas 1% dos isolados não amplificaram para pfhrp2 na PCR (pfhrp2-). A parasitemia média das amostras RDT-/PCR+ foi menor comparando com as amostras RDT+/PCR+, o que poderia explicar parte dos resultados falso-negativos nos RDTs (RDT-/PCR+). Para as amostras que apresentaram resultados divergentes no RDT e PCR, os níveis de PfHRP2 foram avaliados por ELISA. Dessas, 12 de 19 (63%) foram reativas no ensaio, refletindo a maior sensibilidade desse na detecção de PfHRP2 quando comparado ao RDT. As quatro amostras pfhrp2- foram tanto negativas no RDT quanto não reativas no ELISA. Uma análise preliminar de multiplicidade de infecção utilizando o marcador polimórfico msp2 sugeriu que para algumas amostras a coexistência de isolados expressando diferentes quantidades da proteína na mesma infecção (infecção policlonal) poderia explicar algumas das divergências observadas entre PCR, RDT e ELISA. Para caracterizar geneticamente os isolados que circulam na área do estudo, foi sequenciado o gene pfhrp2 de 94 amostras PCR+, mas não houve uma clara associação das sequências com a resposta no ELISA. Sabendo que 6% dos RDTs eram falso-negativos, o monitoramento dos testes é crucial para o controle global da malária, sendo a substituição por RDTs ultra-sensíveis uma opção válida