Aprimoramento e desenvolvimento de métodos diagnósticos in vitro para a sífilis

Abstract

INTRODUÇÃO: A sífilis é uma infecção sexualmente transmissível (IST) causada pela bactéria Treponema pallidum e caracteriza-se por ser crônica e multissistêmica. O cenário epidemiológico atual apresenta elevada incidência, sendo o problema de saúde pública que mais afeta adultos, gestantes e recém-nascidos. O diagnóstico é realizado por meio de testes sorológicos não treponêmicos (VDRL e RPR) e testes treponêmicos (ELISA, QML e IFI). Os testes treponêmicos apresentam desempenho variável, dependendo da fase clínica, mas, entre eles, os imunoenzimáticos se destacam devido à preparação antigênica usada, uma vez que as proteínas recombinantes melhoram a sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade. Assim, o estudo de novos biomarcadores é relevante para melhoria do diagnóstico da IST. OBJETIVO: Avaliar o desempenho diagnóstico de proteínas recombinantes treponêmicas (TpN17 e TmpA) para o imunodiagnóstico da sífilis. MATERIAL E MÉTODOS: Ensaios de dicroísmo circular (DC), espalhamento dinâmico da luz (DLS) e fluorimetria de varredura diferencial (DSF) foram utilizados para avaliar a estrutura e estabilidade dos antígenos. O ELISA sanduíche duplo antígeno (DAgS-ELISA) foi padronizado por meio de checkerboard titration. Setecentas e doze amostras séricas foram obtidas no CEDAP, HEMOBA e IGM, sendo 187 positivas para sífilis, 211 negativas e 314 positivas para outras doenças infecto-parasitárias. Todas as amostras foram reavaliadas quanto à presença ou ausência de anticorpos anti-T. pallidum, utilizando VDRL, FTA-ABS e ELISA. Os resultados foram avaliados por meio da análise dos parâmetros de desempenho diagnóstico. RESULTADOS: Dos pacientes recrutados, 91,5% e 25,2% residem em Salvador e no Distrito Sanitário Barra/Rio Vermelho, respectivamente Na população do estudo, a maioria se considerou masculino sicgênero (89,9%), solteira (o) (89,4%), atendida no ambulatório de IST (55,9%), faixa etária de 25 a 34 anos (41,0%), homossexuais (60,6%), assintomáticos (61,2%), diagnosticada com sífilis primária (52,1%) e com histórico de reinfecção (52,1%). No ELISA indireto, a acurácia foi de 95,4% (TmpA) e 98,7% (TpN17). O índice de Kappa de Cohen (κ) apresentou concordância quase perfeita para as duas moléculas. A TpN17 apresentou reatividade cruzada apenas com a doença de Chagas (1,54%), enquanto a TmpA apresentou reatividade cruzada com doença de Chagas (3,07%), HBV (1,25%), HIV (9,52%) e HTLV (1,64%). No DAgS-ELISA, os valores de especificidade, sensibilidade e acurácia para a TpN17 foram de 100%, 88,9%, 94,3%, respectivamente. O índice κ demonstrou concordância quase perfeita. Foram observadas reatividades cruzadas com doença de Chagas (11,5%), HBV (2,6%), HCV (6,4%) e HTLV (6,8%). Nas análises estruturais, a TpN17 apresentou-se como uma amostra monodispersa, resistente no desnovelamento, mas sem resistência na renaturação. A TmpA foi vista como polidispersa, menos resistente no desnovelamento, mas com maior capacidade de renovelamento. Nos espectros do DC, as estruturas secundárias das proteínas estavam em conformidade com o esperado para elas. CONCLUSÃO: As moléculas TmpA e TpN17 demonstraram elevada capacidade diagnóstica, sendo capazes de diferenciar amostras positivas das negativas para sífilis. No entanto, o ELISA indireto mostrou-se mais promissor. A TpN17 mostrou-se mais resistente às condições extremas de temperatura