Desenvolvimento de teste rápido baseado em imunocromatografia de fluxo lateral para detecção de anticorpos contra Hepatite A em amostras de soro e sangue

Abstract

No Brasil, de 2000 a 2022, foram notificados no Sistema de Informação de Agravos de Notificação 750.651 casos confirmados de hepatites virais. Destes, cerca de 37% são referentes a casos de hepatite A. Após forte queda até 2016, a taxa de incidência de hepatite A no Brasil manteve-se estável. Porém, cidades como Rio de Janeiro e o Rio Grande do Sul apresentaram taxas de 0,9 e 0,8 por 100 mil habitantes, respectivamente, aproximadamente o dobro da taxa nacional. Diante do cenário epidemiológico da hepatite A no Brasil, o emprego de testes rápidos (TR) para o diagnóstico da infecção pode ser uma alternativa promissora aos testes convencionais de laboratório, uma vez que fornecem um resultado imediato, através de uma leitura visual. O presente estudo teve como objetivo desenvolver um TR, baseado na plataforma de imunocromatografia de fluxo lateral para detecção de anticorpos contra a infecção aguda de hepatite A (antiHAV IgM), utilizando uma proteína VP1-2A recombinante. Para isso, a proteína VP1-2A foi expressa em Eschericha coli, purificada e caracterizada. Plasmídeos recombinantes (pET-TOPO® e pET28a®) com inserto de VP1-2A foram selecionados para a reativação do crescimento bacteriano. Maior concentração da proteína foi obtida a partir da construção em pET28a®. As condições de expressão foram padronizadas e a proteína foi purificada através da cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (IMAC) e quantificada. A solubilidade proteica foi avaliada, assim como seu perfil eletroforético e isoelétrico, e sua homogeneidade. A avaliação antigênica foi realizada com amostras-controle anti-HAV (positivas e negativas) através do imunoensaio de multi-antígenos (MAPIA) e microarranjo líquido Esse último ensaio selecionou duas proteínas recombinantes (VP1-RENOV-28A e VP1-540-28A) com potencial uso para a detecção de anticorpos anti-HAV IgM na plataforma de teste rápido. Elas foram triadas na plataforma de TR em diferentes parâmetros: composição do tampão de corrida, concentração do antígeno e porosidade da membrana de nitrocelulose. Na avaliação final, duas combinações de testes rápidos (2H e 2I) apresentaram melhores desempenho, com sensibilidade e especificidade de 66,7%/ 85,5% e 77,8%/ 67,7% respectivamente. O TR na combinação 2H apresentou melhor desempenho para detecção de anti-HAV IgM em amostras de soro