Identificação e teste de candidatos para o desenvolvimento de vacinas bloqueadoras da transmissão da leishmaniose

Abstract

As leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania e sua transmissão ocorre através da picada de fêmeas de flebotomíneos. Lutzomyia longipalpis é o principal vetor da leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi nas Américas. Leishmaniose visceral é um sério problema de Saúde Pública no Brasil. Os mecanismos para controle da doença são falhos, tanto em relação ao inseto vetor, quanto aos tratamentos, e não existe uma vacina eficaz. O controle de doenças causadas por patógenos transmitidos por insetos depende muito da capacidade de conter o vetor, ou interferir na interação parasita-inseto. Uma abordagem inovadora é o uso de vacinas bloqueadoras de transmissão (VBTs) onde o propósito é impedir a transmissão vetorial através da interrupção do desenvolvimento do parasita no vetor. Utilizamos três métodos para investigar os candidatos selecionados para VBTs: 1- alimentação artificial com anticorpo anti-alvo mais o parasita; 2- Infecções de flebotomíneo com Leishmania knockdown ou nocaute para o gene alvo; 3- ensaio de transmissão vetorial artificial. Deste modo, examinamos a sobrevivência, metaciclogênese e capacidade infectiva do parasita no hospedeiro invertebrado com a finalidade de eleger alvos moleculares para desenvolvimento de VBTs. Selecionamos inicialmente uma quitinase de flebotomíneo cuja inativação no inseto reduz a infecção por Leishmania. Não vimos efeito do anticorpo anti-quitinase Llchit1 de flebotomíneo em infecção de L. i. chagasi em L. longipalpis. Escolhemos EF1-alfa, que participa da etapa de alongamento na tradução de proteínas e é secretada pelo parasita atuando na imunomodulação do hospedeiro vertebrado. L. i. chagasi EF1-alfa knockdown cresceu normalmente em cultura e dentro do vetor L. longipalpis Nesses mutantes foi também observada uma tendência ao aumento a microbiota do inseto e infectividade dos parasitas em macrófagos. Usamos L. i. chagasi GT2 knockdown que foi mais infectiva no inseto vetor e macrófago comparado à cepa controle selvagem. Vimos que L. amazonensis com a proteína responsiva a heme (LHR1) knockdown apresentou tendência a ser menos infectiva em L. longipalpis. L. amazonensis com a proteína reguladora de ferro (LIR1) nocaute e L. i. chagasi LIR nocaute foram capazes de infectar L. longipalpis assim como seus respectivos controles selvagens. L. i. chagasi quitinase nocaute foi capaz de infectar normalmente L. longipalpis, mas bloqueou a capacidade do inseto de transmitir os parasitas em um ensaio de transmissão vetorial. Pela primeira vez uma molécula de Leishmania é descrita como sendo capaz de interferir na capacidade vetorial do flebotomíneo. Neste trabalho estamos caracterizando genes de Leishmania importantes para a sobrevivência, estabelecimento e transmissão da infeção em L. longipalpis, o que contribui para um melhor entendimento da interação parasita-inseto e identificando alvos moleculares candidatos ao desenvolvimento de VBTs