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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/67447
AVALIAÇÃO DA TÉCNICA DE IMUNOCITOQUÍMICA PARA O DIAGNÓSTICO DE ESPOROTRICOSE EM FELINOS E CANINOS
Figueiredo, Bruno Fiore de Castro | Date Issued:
2023
Advisor
Co-advisor
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
A esporotricose é uma importante questão de saúde pública no Brasil, devido a hiperendemia que ocorre em alguns municípios das regiões sudeste e sul, além da expansão para as regiões norte e nordeste do país. Nesse contexto, a região metropolitana do Rio de Janeiro é uma das principais áreas de ocorrência dessa micose em seres humanos e animais no mundo. Por isso, alternativas em termos de técnicas diagnósticas dessa doença em cães e gatos devem ser continuamente avaliadas, sobretudo para casos em que o diagnóstico é dificultado devido a ocorrência de baixa carga fúngica nas lesões cutâneas. Técnicas rápidas, sensíveis e não invasivas são desejadas e têm sido estudadas. O presente estudo teve como objetivos: i) padronizar e avaliar a sensibilidade da técnica de imunocitoquímica (ICQ), em comparação com exame citopatológico para detecção de leveduras de Sporothrix spp. em cães e gatos; ii) avaliar a ICQ e o exame citopatológico em relação a carga fúngica das amostras; iii) verificar se há reação cruzada do soro policlonal utilizado na ICQ com outros patógenos; iv) avaliar a especificidade do soro utilizado em espécies patogênicas do gênero Sporothrix. Foram incluídos 51 gatos e 7 cães com diagnóstico definitivo de esporotricose em cultura fúngica atendidos no Laboratório de Pesquisa Clínica em Dermatozoonoses em Animais Domésticos (Fundação Oswaldo Cruz/ Rio de Janeiro) no período de 2022 a 2023, divididos em dois grupos de acordo com uso prévio (CA) ou não (SA) de antifúngico. Amostras citológicas desses animais foram coletadas e examinadas por dois avaliadores para o exame citopatológico e ICQ Para verificação da ocorrência de reações cruzadas, foram confeccionadas lâminas positivas para os microrganismos Histoplasma sp., Cryptococcus neoformans, Candida albicans, Microsporum canis, Leishmania infantum, Toxoplasma gondii, Sporothrix brasiliensis, S. schenckii, S. globosa, S. chilensis, S. mexicana e S. pallida. O exame citopatológico e ICQ detectaram leveduras em, respectivamente, 58,8% e 68,6% dos casos felinos, e as duas técnicas associadas em 72,5% dos casos. Ambas as técnicas foram igualmente sensíveis (28,6%) no diagnóstico de esporotricose canina, e, ao associar as duas, a sensibilidade foi de 42,9%. Em felinos, a sensibilidade do exame citopatológico e ICQ foi maior no grupo SA, sendo 64% e 76%, respectivamente. Em relação a carga fúngica, 64,7% das amostras felinas e 100% das caninas apresentaram carga baixa ou ausente, grupo no qual ocorreram todas as discordâncias entre os observadores. Não houve reação cruzada da ICQ com os patógenos testados e todas as espécies do gênero Sporothrix foram marcadas com o soro policlonal. A ICQ mostrou-se um método rápido, específico, não invasivo e complementar ao diagnóstico citopatológico da esporotricose felina e canina, sobretudo em amostras com baixa carga fúngica. Assim, pode ser uma importante ferramenta alternativa quando não houver a disponibilidade da cultura fúngica ou uma opção frente a métodos invasivos, laboriosos e/ou demorados
Abstract
Sporotrichosis is an important public health problem in Brazil, due to the hyperendemic that occurs in some municipalities in the southeast and south regions, in addition to the expansion to the north and northeast regions of the country. In this context, the metropolitan region of Rio de Janeiro is one of the main areas of occurrence of this mycosis in humans and animals in the world. Therefore, alternatives in terms of diagnostic techniques for this disease in cats and dogs must be continually evaluated, especially for cases in which the diagnosis is difficult due to the occurrence of a low fungal burden in the skin lesions. Fast, sensitive and non-invasive techniques are desired and have been studied. The present study aims to: i) standardize and evaluate the sensitivity of the immunocytochemistry technique (ICQ), in comparison with cytopathological examination for the detection of Sporothrix spp. in dogs and cats; ii) evaluate the ICQ and cytopathological examination in relation to the fungal load of the samples; iii) check for cross-reaction of the polyclonal serum used in ICQ with other pathogens; iv) evaluate the specificity of the serum used in pathogenic species of the genus Sporothrix. 51 cats and 7 dogs with a definitive diagnosis of sporotrichosis in fungal culture treated at the Laboratório de Pesquisa Clínica em Dermatozoonoses em Animais Domésticos (Fundação Oswaldo Cruz/ Rio de Janeiro) in the period from 2022 to 2023 were included and divided into two groups according to preliminary use (CA) or not (SA) of antifungal. Cytological samples from these animals were collected and examined by two observers for cytopathological examination and ICQ To verify the occurrence of cross reactions, positive slides for the microorganisms Histoplasma capsulatum, Cryptococcus neoformans, Candida albicans, Microsporum canis, Leishmania infantum, Toxoplasma gondii, Sporothrix brasiliensis, S. schenckii, S. globosa, S. chilensis, S. mexicana and S. pallida were used. Cytopathological examination and ICQ detected yeasts in, respectively, 58.8% and 68.6% of feline cases, and the two techniques were associated in 72.5% of cases. Both techniques were equally sensitive (28.6%) in diagnosing canine sporotrichosis, and when combined, the sensitivity was 42.9%. In felines, the sensitivity of cytopathological examination and ICQ was higher in the SA group, being 64% and 76%, respectively. Regarding the fungal load, 64.7% of the feline samples and 100% of the canine ones had low or absent fungal load, a group in which all the disagreements between the observers occurred. There was no cross-reaction with the tested pathogens in ICQ and all species of the genus Sporothrix were marked with the polyclonal serum. ICQ proved to be a fast, specific, non-invasive and complementary method for the cytopathological diagnosis of feline and canine sporotrichosis, especially in samples with low fungal burden. Thus, it can be an important alternative tool when fungal culture is not available or an option upon invasive, laborious and/or time-consuming methods
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