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VALIDATION OF A METHOD OF HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY WITH FLUORESCENCE DETECTION FOR MELAMINE DETERMINATION IN UHT WHOLE BOVINE MILK
Fluorescência Natural da Melamina
Adulteração do Leite
Leite Bovino Integral UHT
Detecção de Fluorescência por HPLC
Natural Fluorescence of Melamine
Milk Adulteration
UHT Whole Bovine Milk
HPLC-Fluorescence Detection
Fluorescencia Natural de la Melamina
Adulteración de la Leche
Leche Entera Bovina UHT
Detección de Fluorescencia por HPLC
Author
Affilliation
Abstract in Portuguese
Um método de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção de fluorescência (HPLC-Fluo), baseado em estudos anteriores da emissão natural de fluorescência da melamina (250/365 nm), foi desenvolvido e validado para determinação de melamina como adulterante de leite integral UHT bovino. O tratamento de limpeza de amostras de leite por desproteinização foi completamente otimizado. Nenhum efeito de matriz foi observado e uma faixa linear de 0,05 a 10,0 μg mL−1 foi obtida, com um valor de R2 igual a 0,9998. Os limites de detecção e quantificação da melamina foram 0,0081 e 0,027 μg mL−1 respectivamente, ou 0,023 e 0,076 μg g−1 de leite, respectivamente, considerando a diluição da amostra durante a extração. Extratos de amostras de leite fortificadas com melamina em três níveis de concentração, dois dos quais corresponderam aos níveis estabelecidos pela OMS para melamina em alimentos, levaram a uma recuperação média geral de 95,4 ± 1,2% (n = 9). Este valor de recuperação satisfaz os critérios de desempenho estabelecidos pelo Codex Alimentarius para métodos analíticos adequados para determinação de resíduos alimentares, demonstrando a utilidade e eficácia do método proposto.
Abstract
A method of high performance liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-Fluo), based on previous studies of the natural fluorescence emission of melamine (250/365 nm), was developed and validated for melamine determination as an adulterant of bovine UHT whole milk. The clean up treatment of milk samples by deproteinization was thoroughly optimized. No matrix effect was observed and a linear range from 0.05 to 10.0 μg mL−1 was obtained, with a value of R2 equal to 0.9998. The limits of detection and quantification of melamine were 0.0081 and 0.027 μg mL−1 respectively, or 0.023 and 0.076 μg g−1 of milk, respectively, considering the sample dilution during extraction. Extracts of milk samples fortified with melamine at three concentration levels, two of which corresponded to the levels established by WHO for melamine in foods, led to an overall mean recovery of 95.4 ± 1.2% (n = 9). This recovery value satisfies the performance criteria established by the Codex Alimentarius for analytical methods suitable for determination of food residues, demonstrating the usefulness and effectiveness of the proposed method.
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Se desarrolló y validó un método de cromatografía líquida de alta resolución con detección de fluorescencia (HPLC-Fluo), basado en estudios previos de la emisión de fluorescencia natural de la melamina (250/365 nm), para la determinación de melamina como adulterante de leche entera bovina UHT. Se optimizó minuciosamente el tratamiento de limpieza de las muestras de leche mediante desproteinización. No se observó efecto de matriz y se obtuvo un rango lineal de 0,05 a 10,0 μg mL−1, con un valor de R2 igual a 0,9998. Los límites de detección y cuantificación de melamina fueron 0,0081 y 0,027 μg mL−1 respectivamente, o 0,023 y 0,076 μg g−1 de leche, respectivamente, considerando la dilución de la muestra durante la extracción. Los extractos de muestras de leche fortificadas con melamina en tres niveles de concentración, dos de los cuales correspondían a los niveles establecidos por la OMS para la melamina en alimentos, dieron como resultado una recuperación media global de 95,4 ± 1,2% (n = 9). Este valor de recuperación satisface los criterios de desempeño establecidos por el Codex Alimentarius para métodos analíticos adecuados para la determinación de residuos en alimentos, lo que demuestra la utilidad y eficacia del método propuesto.
Keywords in Portuguese
Determinação de MelaminaFluorescência Natural da Melamina
Adulteração do Leite
Leite Bovino Integral UHT
Detecção de Fluorescência por HPLC
Keywords
Melamine DeterminationNatural Fluorescence of Melamine
Milk Adulteration
UHT Whole Bovine Milk
HPLC-Fluorescence Detection
Keywords in Spanish
Determinación de MelaminaFluorescencia Natural de la Melamina
Adulteración de la Leche
Leche Entera Bovina UHT
Detección de Fluorescencia por HPLC
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