Avaliação de compostos de bloqueio de infecção de Anopheles darlingi por Plasmodium vivax

Abstract

Estudos vêm sendo desenvolvidos para contribuir com o controle da malária, sendo muitos deles envolvidos na estratégia de bloqueio de transmissão do parasita no mosquito vetor. Essas pesquisas estão direcionadas em acelerar a identificação de potenciais compostos terapêuticos e realização da avaliação da eficácia por meio de modelos experimentais ex vivo, visando interromper as fases inicias do Plasmodium no mosquito. A fim de contribuir com esses estudos, este trabalho teve como objetivos (i) avaliar o efeito bloqueador dos compostos por Direct Membrane-Feeding Assays (DMFA); (ii) definir a menor concentração efetiva dos compostos por meio de DMFA; (iii) analisar a influência dos compostos na taxa de ingurgitamento; (iv) estimar a influência dos compostos na sobrevivência das fêmeas de Anopheles darlingi pós- DMFA; e (v) avaliar a ação dos compostos com atividade efetiva de bloqueio total de transmissão do Plasmodium vivax em An. darlingi por meio de ensaio de contato direto. Foram utilizadas nos experimentos fêmeas da espécie An. darlingi, com idades entre três e cinco dias, provenientes da colônia mantida na Plataforma de Produção e Infecção de Vetores da Malária (PIVEM/FIOCRUZ-Rondônia). Sete compostos previamente selecionados (S039-3190, S039-2589, PF-03814735-APE, PF- 03814735-MCE, AT9283, CYC-116, ZM-447439) foram submetidos ao DMFA em uma concentração inicial de 10μM. Posteriormente, compostos que apresentaram Atividade de Bloqueio de Transmissão (%TBA) e/ou Redução da Atividade de Transmissão (%TRA) acima de 90%, foram avaliados em concentrações menores (7μM, 5μM e 2μM). Para cada grupo experimental, controle e composto, utilizou-se um conjunto de 60 fêmeas. Os experimentos foram conduzidos com amostras sanguíneas obtidas de pacientes infectados com P. vivax ++ ou mais, sendo o plasma sanguíneo do paciente substituído por soro AB+ inativado e oferecidos as fêmeas por meio do repasto sanguíneo utilizando mamadeiras de vidro acopladas ao banho- maria. No sétimo dia após a infecção, foram realizadas as dissecções dos intestinos médios e contagem de oocistos. Em relação as análises de dados, o efeito bloqueador dos compostos foi calculado pela %TBA e %TRA. As taxas de ingurgitamentos foramcomparadas pelo teste qui-quadrado com correção de Yates e as curvas de sobrevivências Kaplan-Meier foram construídas para estimar as taxas de sobrevivência pelo teste Log-rank. Dos sete compostos avaliados, apenas o CYC-116 na concentração de 10μM apresentou resultados promissores, demonstrando uma capacidade significativa de reduzir a atividade de transmissão em 94,9%, portanto o único composto a ser avaliado em concentrações inferiores de 7μM, 5 μM e 2 μM (respectivamente as TRA: 61,34%, 44,946% e 14,95%). Para as taxas de ingurgitamento, três compostos mostraram diferenças significativas, com redução para os compostos PF-03814735-APE (p<0,0001) e PF-03814735-MCE (p<0,0001) e aumento para ZM-447439 (p=0,0114). Os setes compostos avaliados não influenciaram a sobrevivência dos mosquitos durante o período de acompanhamento. Em relação aos ensaios de contato direto, somente o CYC-116 foi avaliado, não demonstrando diferenças estatísticas, tanto para intensidade (p=0,6142) quando para a prevalência da infecção (p=0,807). Conclui-se que, apenas um composto, o CYC- 116 a 10 μM, dos sete avaliados foi capaz de reduzir >90% a atividade de transmissão. Embora o CYC-116 esteja em estudo clínico para tumores sólidos, são necessárias pesquisas adicionais para avaliar seu potencial como tratamento específico para a malária.